外泌体电镜拍出来是这样的，希望大家给点建议

zjm337

第一次分离外泌体，用超速离心的方法，最后重悬到PBS中，滴了20微升重悬液到铜网上自然晾干（半小时左右），又滴了20微升磷钨酸到铜网上自然晾干（半小时左右），然后过了一个小时拿去检测拍出来的TEM是这样的黑块。。。不知道问题出在哪，希望大家能给点建议。。。

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hzangs 发表于 2015-11-27 20:15
我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬，大概30ul。 然后10ul上样到铜网，沉淀1min，滤纸吸掉多余液 ...

好的。。谢谢！

zjm337

zqy2002 发表于 2015-11-27 20:37
楼主上图中未见到明确的exosome；倒数第二张图中是背景色，不是exosome。描述的染色方法错误。磷钨酸负染请 ...

请问一下第一张和第二张里面的是不是也是背景色？没有产物？我是用了200ml上清超速离心，到最后有白色沉淀产生，用1mlPBS重悬，最后制样拍TEM，很奇怪为什么会没有东西呢？

zjm337

zqy2002 发表于 2015-11-29 19:29
也许第一二张片子里面白色底色是exosome也不一定。但目前不能看出来。

这是我今天新拍的TEM，感觉有点怪。。特别是第一第二张，请问这个是exosome吗？

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hzangs 发表于 2015-11-27 20:15
我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬，大概30ul。 然后10ul上样到铜网，沉淀1min，滤纸吸掉多余液 ...

可不可以帮我看看我今天新拍的TEM。。。总觉得怪怪的呢。。谢谢！

zjm337

zqy2002 发表于 2015-11-30 20:08
最后一张圆圈有点像，但是这样的照片可能不能过编辑的那一关。还是让有经验的电镜室老师帮你把关。否则自己 ...

哦哦。。好的。。想问问我第一张那种一个一个的是什么？？好奇怪。。而且很多。。

zjm337

zqy2002 发表于 2015-11-30 20:08
最后一张圆圈有点像，但是这样的照片可能不能过编辑的那一关。还是让有经验的电镜室老师帮你把关。否则自己 ...

还想问问你在制作TEM样品时，加了一滴exosome的PBS液体在铜网上5min之后，是直接就滴一滴磷钨酸还是等干了才滴加？我在加样品和磷钨酸的时候在铜网上都是一个水珠状。。5min中之后直接从旁边吸取多余的感觉能留在铜网上的很少了。。

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hzangs 发表于 2015-12-1 09:32
可以

就在我这篇帖子的第一页。。我传到上面去了。。谢谢!

zjm337

hzangs 发表于 2015-12-1 15:44
看着还是不对……  你在哪里打电镜的？　　是上海的么？

不是。。中南大学。。是不是我的FBS没有分离原有的exosome，对这个有影响？还是制样有问题？制样的时候我滴加样品在铜网上是水珠状的，5min之后用滤纸从旁边吸掉多余的，没有得到晾干，就滴加了磷钨酸（在铜网上也是成水珠状，没有散开），5min之后用滤纸吸掉多余的，然后用灯烘干。。。可是在拍TEM的时候铜网上像沾着一块一块黑的脏东西，不均匀，有一块好像还是可以飘动的。。我不知道是不是没有完全干造成的。。

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hzangs 发表于 2015-12-1 15:44
看着还是不对……  你在哪里打电镜的？　　是上海的么？

不是。。中南大学。。是不是我的FBS没有分离原有的exosome，对这个有影响？还是制样有问题？制样的时候我滴加样品在铜网上是水珠状的，5min之后用滤纸从旁边吸掉多余的，没有得到晾干，就滴加了磷钨酸（在铜网上也是成水珠状，没有散开），5min之后用滤纸吸掉多余的，然后用灯烘干。。。可是在拍TEM的时候铜网上像沾着一块一块黑的脏东西，不均匀，有一块好像还是可以飘动的。。我不知道是不是没有完全干造成的。。