外泌体电镜拍出来是这样的，希望大家给点建议

hzangs

zjm337 发表于 2016-1-9 21:10
想问问你做WB的时候每个孔加的exosome蛋白浓度是多少？我180ml上清提取出来的蛋白浓度用BCA法检测出来特 ...

基本每个空 上两三微克

hzangs

咏咩咩 发表于 2016-1-10 20:48
请问做电镜的标本是直接用重悬的原液做的吗?还是要稀释了再做?

我是直接用重悬液做的。这个和你的exosome浓度有关。

hzangs

zjm337 发表于 2016-1-11 15:08
是每个孔的蛋白总量是两三微克，还是两三微克每微升？从细胞中提取的蛋白每孔加入的量和exosome的一样吗 ...

当然是每个孔 总共上两三微克  o(╯□╰)o   

hzangs

咏咩咩 发表于 2016-1-12 17:42
如果是1000倍稀释看nanosight有八次方。用原液看电镜可以吗？

这个 ，我不知道……
我当时没有用nanosight看。 直接测的蛋白浓度 大概 20ug左右吧

hzangs

zjm337 发表于 2016-2-21 21:08
你好，想问问exosome测了蛋白浓度之后可以换算成摩尔浓度吗？我看的文献里好像都是直接用蛋白浓度表示exo ...

目前paper里面只有两种常见的反映exosomes量的方法，一种是用蛋白质的量反应exosomes的数量，一种是用仪器测定的粒子数目反映exosomes的量，还没有见过蛋白质 换算成exosomes摩尔浓度的方法。

hzangs

zjm337 发表于 2016-2-23 08:48
好的，谢谢！我们这边没有nanosight仪器，表征的时候我不测exosome的粒子数可以吗？ ...

做exosomes的鉴定和定性的时候  还是要有一个粒子数和粒子直径分布的数据的。
后面做实验 出表型  做机制的时候没有必要每次都测粒子数

hzangs

zjm337 发表于 2016-4-1 08:27
您好，问问您150~200ml上清大概能离心出多少微克蛋白的exosome？

我的细胞系 60-100ml  可以拿到约 20-40ug    不同的细胞系产量有差别。