外泌体电镜拍出来是这样的，希望大家给点建议

zjm337 · 发表于 2015-12-2 21:31:18

hzangs 发表于 2015-12-2 09:42
这个就不好说了。。。
因为我们的样品都是去掉了FBS里面的exosomes。 FBS里面的exosomes的含量还是很高的 ...

好的。。谢谢！我再重新来一遍看看。。

zjm337 · 发表于 2015-12-21 22:30:33

本帖最后由 hzangs 于 2015-12-22 09:41 编辑

hzangs 发表于 2015-12-2 09:42
这个就不好说了。。。
因为我们的样品都是去掉了FBS里面的exosomes。 FBS里面的exosomes的含量还是很高的 ...

你好，这是我新拍的TEM，我感觉和你其他帖子里发的有些相似，你帮我分析分析是不是？？谢谢。。

zjm337 · 发表于 2015-12-24 08:50:40

子非鱼发表于 2015-12-23 14:23
咿咿...我怎么看不到新的图片....

这是那天拍的TEM

zjm337 · 发表于 2015-12-24 11:59:10

hzangs 发表于 2015-12-23 15:42
可以的话请把你的电镜图打一下粗线，之后发上来给大家学习一下谢谢 ...

请问一下，你买的抗体是在abcam上买的吗？价格好贵啊。。。你们买的货号还有吗？

zjm337 · 发表于 2015-12-24 15:37:51

hzangs 发表于 2015-12-24 12:06
ALIX 是CST的货号：#2171
TSG101是abcam的货号：# 5377-1

好的，谢谢！你没有检测CD63吗？

zjm337 · 发表于 2015-12-29 14:58:03

hzangs 发表于 2015-12-24 16:06
没有去检测这个。 CD63 也是个marker 但是基本上杂两个marker 就可以说明问题了。没有必要杂那么多 ...

好的，谢谢！

zjm337 · 发表于 2015-12-29 15:05:32

revive_0220 发表于 2015-12-26 20:20
请问一下你你是怎么离心的，我最后用10W g 2h 的沉淀物是淡黄色的，但是电镜的结果比你的好 ...

超速离心的方法，100ml 上清，300g 10min，2000g 10min，10000g 30min，100000g 70min 2次，再重悬到50微升PBS中

zjm337 · 发表于 2016-1-9 20:51:35

revive_0220 发表于 2015-12-29 22:16
我最近的外泌体很难吹打溶解，吹打下来是一些碎片状的，感觉像有一些黏连物质，不知道你有出现这种状况不 ...

你提取exosome的培养基用之前离心过吗？多吹打几次应该可以吹打下来吧

zjm337 · 发表于 2016-1-9 21:10:02

hzangs 发表于 2015-12-24 16:06
没有去检测这个。 CD63 也是个marker 但是基本上杂两个marker 就可以说明问题了。没有必要杂那么多 ...

想问问你做WB的时候每个孔加的exosome蛋白浓度是多少？我180ml上清提取出来的蛋白浓度用BCA法检测出来特别低，每提取一次勉强能做一次WB。。总觉得自己方法有问题呢。。

zjm337 · 发表于 2016-1-11 15:08:41

hzangs 发表于 2016-1-9 22:16
基本每个空上两三微克

是每个孔的蛋白总量是两三微克，还是两三微克每微升？从细胞中提取的蛋白每孔加入的量和exosome的一样吗？我们实验室跑WB的时候每孔要加30微克蛋白，测出的每次从exosome中提取的没有这么多。。

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