外泌体RNA提取

hzangs

wjy 发表于 2016-7-23 15:27
求问，求帮助，新手用TRIZOL提的外泌体总RNA也是这种情况，浓度比你好低，吸光度值1.48，根据吸光度值来 ...

这个好像没什么好办法。  能做的就是加大外泌体的起始量  然后可以提高最后抽提出的RNA的量  质量可能也会好一点

wjy

hzangs 发表于 2016-4-5 18:17
后边的  65.6ng 比值1.48  和我之前抽提到的应该比较类似。

是的  5min

求问，求帮助，新手用TRIZOL提的外泌体总RNA也是这种情况，浓度比你好低，吸光度值1.48，根据吸光度值来看是不是蛋白和酚类污染啊？怎么解决啊？浓度还低。我的提的RNA想做二代测序，这种样品质量估计不行啊。

旋转的尾音

hzangs 发表于 2016-4-5 18:17
后边的  65.6ng 比值1.48  和我之前抽提到的应该比较类似。

是的  5min

明白了，谢谢分享

hzangs

旋转的尾音 发表于 2016-4-5 14:22
太感谢了，这个信息对我太有帮助了，谢谢分享~~~我之前尝试性提了两个，一个2.3ng/ul，比值1.97；一个65. ...

后边的  65.6ng 比值1.48  和我之前抽提到的应该比较类似。

是的  5min

旋转的尾音

hzangs 发表于 2016-4-5 10:50
这方面的文献没读过。都是以前抽RNA的经验。  qiagen抽提膜泡内RNA的kit  我一个朋友使用过了，出来的量 ...

请问你这边的经验就是1ml TRIzol，然后室温放置多久？常规5min？谢谢。

旋转的尾音

hzangs 发表于 2016-4-5 10:50
这方面的文献没读过。都是以前抽RNA的经验。  qiagen抽提膜泡内RNA的kit  我一个朋友使用过了，出来的量 ...

太感谢了，这个信息对我太有帮助了，谢谢分享~~~我之前尝试性提了两个，一个2.3ng/ul，比值1.97；一个65.6ng，比值1.48。正苦恼为什么比值这个样子。谢谢~

hzangs

旋转的尾音 发表于 2016-4-5 10:45
感谢回复，请问是否有文献给我学习一下。之前提了一次，一个样本含量很低，另一个纯度不高，所以还在摸索 ...

这方面的文献没读过。都是以前抽RNA的经验。  qiagen抽提膜泡内RNA的kit  我一个朋友使用过了，出来的量和我trizol抽提产量基本一样。 而且260/280的值  也基本都是一样，只有1.4-1.7那样。   确实产量低，也是因为这个原因，所以260/280对这个RNA质量没有什么评价意义

旋转的尾音

hzangs 发表于 2016-4-1 19:33
1ml  trizol就可以。 但是体系含水量高，你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离 ...

感谢回复，请问是否有文献给我学习一下。之前提了一次，一个样本含量很低，另一个纯度不高，所以还在摸索阶段。

hzangs

旋转的尾音 发表于 2016-4-1 17:05
你好，请问50微升的PBS里，一般用多少trizol？

1ml  trizol就可以。 但是体系含水量高，你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离子强度 来促进RNA沉淀

旋转的尾音

woshiyywlly 发表于 2016-3-22 14:18
trizol和trizol LS都可以，大概100ug exosome能提出0.5-1.5 ug 的RNA（从细胞上清中提取的exosome，RNA含量 ...

你好，请问50微升的PBS里，一般用多少trizol？