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外泌体RNA提取

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发表于 2016-7-29 16:16:35 | 显示全部楼层
大家提取的外泌体总RNA 有跑过RNA电泳吗?第一条是DNAmarker(原谅没有RNAmarker),第二条是外泌体RNA(啥也没有,),第三条是细胞的RNA有18s和28s,大家跑都这样吗

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发表于 2016-7-29 17:24:32 | 显示全部楼层
wjy 发表于 2016-7-29 16:09
想像你你咨询一下,你外泌体提取的RNA有跑RNA电泳吗?有18s和28s的条带吗?我和细胞同时提取的总RNA,细胞 ...

外泌体中是不会有18s 和28s的条带的。   RNA电泳是检测RNA灵敏度非常低的手段。你提取出的那点外泌体RNA 根本不足以让你在胶里看到。
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发表于 2016-7-29 17:29:32 | 显示全部楼层
恩恩,对,外泌体是没有rRNA,跑电泳没有的原因是RNA量太低了是吗?检测不到是吗?那怎么检测那?那细胞组从电泳上看应该是18S和28s吗?
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发表于 2016-7-29 17:31:00 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2016-7-29 17:24
外泌体中是不会有18s 和28s的条带的。   RNA电泳是检测RNA灵敏度非常低的手段。你提取出的那点外泌体RNA  ...

恩,对,外泌体是没有rRNA,跑电泳没有的原因是RNA量太低了是吗?检测不到是吗?那怎么检测那?那细胞组从电泳上看应该是18S和28s吗?你的外泌体提取的总RNA,怎么检测那?
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发表于 2016-7-29 21:19:12 | 显示全部楼层
wjy 发表于 2016-7-29 17:31
恩,对,外泌体是没有rRNA,跑电泳没有的原因是RNA量太低了是吗?检测不到是吗?那怎么检测那?那细胞组从 ...

外泌体提取的总RNA  如果有条件 直接上agilent2100。没有条件的话 一般选取一两个比较常见的基因跑个qPCR看看, 比如GAPDH之类的基因。
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发表于 2016-8-6 17:13:33 | 显示全部楼层
这些问题对新手来说太有帮助了,我还想问一下大家提的外泌体RNA的吸收峰值是多少啊?我们的老是在270nm处,浓度1.5-1.6。
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发表于 2016-11-9 10:56:23 | 显示全部楼层
你们有提取完外泌体之后不用PBS重悬直接用TRIZOL提取的吗?我用的是250ul的血清提取的外泌体,应该加多少量的TRIZOL比较合适呢,求指导,谢谢!
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发表于 2017-2-13 21:33:58 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2016-4-1 19:33
1ml  trizol就可以。 但是体系含水量高,你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离 ...

你好,关于加入异丙醇后再加百分之10的醋酸钠,这一步能不能详细的说一下呢,最好是步骤的那种,十分感谢
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发表于 2017-4-13 15:55:45 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2016-4-1 19:33
1ml  trizol就可以。 但是体系含水量高,你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离 ...

请问没有加pbs的外泌体里面也是用1mltrizol吗
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发表于 2018-8-22 11:06:44 | 显示全部楼层
请问提rna需要多少外泌体的量呢?我是做的细胞上清 , 可以大概告诉我需要多少上清 或者 外泌体particle 或者 ug数?
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