外泌体RNA提取

hzangs

trizol 或者随便用一个微量RNA提取试剂盒
我是用trizol的

hzangs

旋转的尾音 发表于 2016-4-1 17:05
你好，请问50微升的PBS里，一般用多少trizol？

1ml  trizol就可以。 但是体系含水量高，你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离子强度 来促进RNA沉淀

hzangs

旋转的尾音 发表于 2016-4-5 10:45
感谢回复，请问是否有文献给我学习一下。之前提了一次，一个样本含量很低，另一个纯度不高，所以还在摸索 ...

这方面的文献没读过。都是以前抽RNA的经验。  qiagen抽提膜泡内RNA的kit  我一个朋友使用过了，出来的量和我trizol抽提产量基本一样。 而且260/280的值  也基本都是一样，只有1.4-1.7那样。   确实产量低，也是因为这个原因，所以260/280对这个RNA质量没有什么评价意义

hzangs

旋转的尾音 发表于 2016-4-5 14:22
太感谢了，这个信息对我太有帮助了，谢谢分享~~~我之前尝试性提了两个，一个2.3ng/ul，比值1.97；一个65. ...

后边的  65.6ng 比值1.48  和我之前抽提到的应该比较类似。

是的  5min

hzangs

wjy 发表于 2016-7-23 15:27
求问，求帮助，新手用TRIZOL提的外泌体总RNA也是这种情况，浓度比你好低，吸光度值1.48，根据吸光度值来 ...

这个好像没什么好办法。  能做的就是加大外泌体的起始量  然后可以提高最后抽提出的RNA的量  质量可能也会好一点

hzangs

wjy 发表于 2016-7-25 09:25
恩恩 ，我是刚开始做提RNA ,量是有点小，想先摸摸条件试一试。那污染那？看吸光度1.48不是蛋白污染吗？换 ...

http://www.exosome.com.cn/forum. ... amp;page=11#pid7725  你可以看看这个贴子里的protocol

1.48 有点太低了   估计换kit  意义也不大。目前外泌体抽提RNA 好像没有见过效果很好的

hzangs

wjy 发表于 2016-7-29 16:09
想像你你咨询一下，你外泌体提取的RNA有跑RNA电泳吗？有18s和28s的条带吗？我和细胞同时提取的总RNA,细胞 ...

外泌体中是不会有18s 和28s的条带的。   RNA电泳是检测RNA灵敏度非常低的手段。你提取出的那点外泌体RNA 根本不足以让你在胶里看到。

hzangs

wjy 发表于 2016-7-29 17:31
恩，对，外泌体是没有rRNA,跑电泳没有的原因是RNA量太低了是吗？检测不到是吗？那怎么检测那？那细胞组从 ...

外泌体提取的总RNA  如果有条件 直接上agilent2100。没有条件的话 一般选取一两个比较常见的基因跑个qPCR看看， 比如GAPDH之类的基因。