本人使用life公司试剂盒提取血浆外泌体的RNA浓度

jianwen

400ml血浆分离出的外泌体，

1、往外泌体沉淀中加入1ml Trizol，混匀（反复吹打或涡旋），4℃放置10min。
2、按比例（1ml Trizol：200ul氯仿）加入氯仿200ul，剧烈振荡，4℃放置15min。
4、4℃ 12000×g离心15min。
5、吸取上层水相至新EP管（350ml）。
6、按比例（1ml Trizol：500ul异丙醇）加入异丙醇500ul，混匀，4℃放置10min。
7、4℃ 12000×g 离心10min，弃上清，RNA 沉于管底。
8、按比例（1ml Trizol：1ml 75%乙醇）加入75%乙醇1ml，温和振荡。
9、4℃ 12000g 离心 5min，尽量弃上清（重复75%乙醇洗涤一次）。
10、室温晾干。
11、加用5ulRNA溶解液溶解沉淀RNA。

所测RNA浓度：50多ug/ml

jianwen

hzangs 发表于 2016-3-10 19:12
楼主 400ul血浆吧？

不好意思，打错了，是400ul。
感觉提取的RNA浓度比较低。后面用800ul提取的外泌体送去做高通量测序结果也差，说RNA浓度太低了

jianwen

zzy 发表于 2016-5-11 15:09
楼主，血浆还是血清？

用的血浆，最近在做血清的

jianwen

胖子的心境 发表于 2016-3-21 10:05
50ug/ml，只用了5ul的水溶解？量这么少吗。新手问问

确实好少，还在摸索中

jianwen

Bridgen桥生物 发表于 2016-3-15 22:30
用一般的试剂盒提取出的外泌体很难提到完整的外泌体，可通过颗径分析知道自己提出的是否完整，数量多少。 ...

检测了浓度和大小，还可以

jianwen

ashey 发表于 2016-3-13 21:30
life不是有专门的提取exosome RNA的试剂盒吗？有没有尝试下看看结果如何？exosome中RNA可按照细胞RNA提取步 ...

有些文献是用Trizol的，还要用专门试剂盒的，这个只是先测下看看

jianwen

wxy 发表于 2016-6-6 20:38
楼主，前一段时间我手工提exosomes中的总RNA浓度跟你一样，不知道你现在有解决的办法了么 ...

最近我又试了次，用TRIZOL提取浓度还是一样，但发现直接提取血浆的RNA浓度是外泌体的十多倍。公司是用专门提miRNA的试剂盒提的，浓度确实高些