刚跑了一次WB 为什么没结果

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-2 17:57:01

本人是用英杰公司的试剂盒提取的外泌体，跑WB用的是abcam的小鼠cd63，当时加目标一抗稀释比例1比500，为什么跑出来β-actin有条带，而目标抗体没有，不知道哪个环节出了问题

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-4 20:54:54

hzangs 发表于 2016-4-4 14:07
β-actin 属于高丰度的蛋白，很容易监测到的。这个参考意义不大。
你可能需要考虑一下两个问题：
1、你起 ...

我提的是炎症刺激星形胶质细胞的上清液，当时取了3瓶上清液，12ML总共，用的试剂盒提的，抗体是ABCAM的CD63，稀释比例选的一比五百，不懂是不是稀释浓度不够啊

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-5 09:28:46

hzangs 发表于 2016-4-4 21:15
你上样蛋白多少ug？

蛋白具体含量没测，用BCA法显示有蛋白，主要就是求教我抗体稀释比例对嘛，有没有标准的参考

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-5 11:50:20

hzangs 发表于 2016-4-5 09:36
你的抗体稀释比例没问题。但是一般WB的抗体会按照1:1000--1:10000的比例稀释。没有必要1:500
abcam ...

好的多谢啦在问一下一般试剂盒离心出来的外泌体能看的到沉淀嘛，如果看不到是不是量不够

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-12 09:16:36

hzangs 发表于 2016-4-5 12:03
如果你是用的是invitrogen那款沉淀试剂盒，没有看到沉淀的话你可能没有拿到任何东西。
沉淀试剂盒往往 ...

好的多谢啦

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