PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

whjy2004 发表于 2016-5-19 16:10
请问楼主 ：制备exosome-free FBS 的离心条件？转速和时间

110000g  14-16h~

hzangs

子非鱼 发表于 2016-5-20 11:42
斑竹，我用ExtraPEG，提取培液没有看到沉淀。之前用SBI的kit提取8ml就能见沉淀了，上质谱的结果与ExoCart ...

PEG 是按照我说的那个配置的么？  16%的？  混匀了没？

hzangs

lilingexosome 发表于 2016-5-21 18:56
我想请问一下能不能提供一下文献题目呀，我是新手才进来的，看不到呀，谢谢 ...

http://www.exosome.com.cn/forum. ... &extra=page%3D1
这里有原文

hzangs

Mars 发表于 2016-5-24 12:40
这一步是不是文献里最后100000g超高速离心前用PBS洗啊？你用多少啊？文献里说的是1ml
...

我秀的数据中  是用了1ml
现在我用这个方法的时候 会用30ml

hzangs

katuysha 发表于 2016-5-24 15:51
楼主，你好，我是新手，想问一下重悬用的PBS是不是也要进行预处理，如果需要，该进行什么样的处理？ ...

高压灭菌，然后 0.22um的滤器 再过滤除去PBS里的颗粒。

hzangs

Mars 发表于 2016-5-25 13:37
买现成的PBS可以吗

可以的呀。  那就不用过滤了。  我们用的都是自己配的PBS

hzangs

pkuaction 发表于 2016-5-27 08:59
本人外泌体新手，请教您一个小问题：第7步通过PEG6000沉淀低速离心收集后加入ＰＢＳ重悬后，超高速离心的目 ...

最后一步的目的是去除杂蛋白。  沉淀法容易带杂蛋白下来，最后用PBS洗一下

hzangs

katuysha 发表于 2016-5-30 13:09
谢谢楼主的回复，！

太可气了

hzangs

pytruth 发表于 2016-5-31 16:01
楼主，想咨询一下，从细胞上清液提取小囊泡，怎么知道这个细胞外泌体分泌的多不多呢？如何确定需要用多少毫 ...

细胞释放外泌体的量多不多 只能通过自己做实验逐渐尝试。  一般分泌量中等的细胞系使用60ml上清提外泌体是可以的。   PEG法提取效果和沉淀试剂盒 差不多，但相比超速离心分离 还是差了些。

hzangs

Mars 发表于 2016-5-31 19:56
问一下，你在用100000g超速离心前要把原先细胞上清和PEG混合液先浓缩一下吗 ...

是将Peg沉淀下来的东西 PBS重悬，然后超离