PEG聚沉+超速离心试用报告：Sci Rep文章技术重复

hzangs · 发表于 2016-6-15 14:31:34

菡姝发表于 2016-6-15 13:40
你好，我想请教一下，重悬与PBS时，对PBS的体积有要求吗？

没有确切的要求。

hzangs · 发表于 2016-7-28 16:36:22

小孔加油发表于 2016-7-28 16:11
请问，用PEG提取的外泌体培养细胞，会不会影响细胞生长？万分感谢！

这个不太清楚。从我自己的数据看多少会影响，就像其他的沉淀试剂盒一样多少会影响，设置好对照很重要。

hzangs · 发表于 2016-7-28 19:29:06

小孔加油发表于 2016-7-28 17:22
请问对照如何设置呢

需要设置严格一些。这个要具体问题具体分析，不是一两句话说的清楚的。

hzangs · 发表于 2016-7-28 21:30:02

神外勇哥哥发表于 2016-7-28 21:17
楼主用了多少毫升上清液啊感觉沉淀出来的好明显啊还有想问下跑Western时候外泌体裂解了嘛加了多少裂解液 ...

我用的巨噬细胞上清大概10ml 巨噬细胞囊泡释放量很大的。

没有裂解，直接loading 煮煮就跑了

hzangs · 发表于 2016-8-4 09:57:00

林剑邦发表于 2016-8-3 21:05
感谢楼主！实验室有现成的PEG 8000，请问可以用PEG 8000按比例稀释成6000吗？还有一个问题，PEG方法对杂蛋 ...

6000和8000指的是PEG的分子量，这两者是不能相互换算的，建议你买一点。直接可以从生工生物买国产的，我当时买的国产的，1斤才几十块钱 O(∩_∩)O哈哈~。另外这个方法对杂蛋白含量高的样品不太适用，最好用PEG+超离的方法尝试。

hzangs · 发表于 2016-8-5 00:34:31

林剑邦发表于 2016-8-4 23:38
谢谢楼主回复！！我最近看到一篇用PEG的文章，它提出配PEG不加Nacl提取效果会更好呢，而且它是用的PEG 1000 ...

这个我没有尝试。

hzangs · 发表于 2016-8-5 00:34:35

林剑邦发表于 2016-8-4 23:38
谢谢楼主回复！！我最近看到一篇用PEG的文章，它提出配PEG不加Nacl提取效果会更好呢，而且它是用的PEG 1000 ...

这个我没有尝试。

hzangs · 发表于 2016-12-12 12:23:41

nene 发表于 2016-12-12 12:20
急问，弱弱问，PEG可以高温湿热灭菌吗？看到楼主是用filter灭菌的

这个好像不行，看一些网上的说法高温高压可能会使大分子PGE链变短。先将水灭菌，然后配置PEG 之后用0.45的过滤是可以的。

hzangs · 发表于 2016-12-12 22:32:03

nene 发表于 2016-12-12 12:35
谢楼主！马上用的话，不灭菌如何呢？

分子实验可以，但是细胞实验的话很容易污染~

hzangs · 发表于 2017-3-5 13:22:01

nick_a19 发表于 2017-3-3 22:17
这种方法提取的外泌体生物活性还保留了吗可以被细胞摄取吗

你可以参考一下这篇原文。他们有分析过外泌体生物活性，在他们的结果来看不影响

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