求助：血清外泌体提取250ng，跑电泳啥也没有...没有...

子非鱼

RT,SBI提取250ul血清的exo后，60ulPBS溶解后冻存在-80℃，最近拿出来提了RNA，测浓度后总量250ng，但跑电泳后什么也没有，没有条带！！但是同时提取的细胞和组织都有明显的条带，我知道exo和cell、tissue的RNA条带模式不一样，但是应该在20-200之间有个条带吧，但是什么也没有，有可能被降解完吗？可是exo不是相对稳定的吗？难道一开始提出来就加TRIZO吗？或者250ng对于跑电泳量来说还是太少？。。走过的路过的赶紧来指点迷津啊

子非鱼

hzangs 发表于 2016-5-4 21:11
电泳检测RNA  灵敏度非常差……    没有意义的。
你可以考虑逆转录一些，然后跑几个PCR  看看能不能克隆到 ...

我们准备做exo内miRNA芯片，筛选差异性exosomal miRNA，公司要求我们跑电泳图看看我们提出来的exo-RNA质量，结果一跑电泳，心都凉了...
斑竹的办法我试试...

子非鱼

hzangs 发表于 2016-5-5 00:50
一般小RNA电泳不用琼脂糖胶

那用什么胶？

子非鱼

hzangs 发表于 2016-5-5 18:01
PAGE胶

斑竹，V5~~我刚问了下我们这里表观遗传学的人，和您说的一样！膜拜~~，幸亏问了，不然我就在错误的道路上越走越远了.......

子非鱼

刚看到留言，统一回复：250ul血清确实提取不到那么多RNA，之前检测存在错误。我们后来用1ml的血清提取外泌体，试剂沉淀法提取，然后Qiagen RNA试剂盒提取RNA，有250-400 ng。