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求助,从exosome提出RNA后的qPCR.

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发表于 2014-12-30 16:07:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
求助各位,由于标本有限,从exosome提出的RNA只有10ng左右,想问下你们做逆转录时用的是哪一家的试剂盒?谢谢各位兄弟姐妹!谢谢!
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发表于 2015-6-12 08:55:21 | 显示全部楼层
这是我昨天收到的技术支持发给我的文件,关于SBI研究外泌体miR的一些相关设计,感兴趣的可以看一下,我还没来得及看,有兴趣大家一起交流下~

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发表于 2015-1-14 17:05:45 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-1-9 09:22
你有相关文献么?可以贴出来分享一下~我对这方面内容目前了解的不多,就以U6作为内参的,是可以跑出来的 ...

因为exosome中u6的含量不太稳定,所以一般人为的加入外参来定量。我也不是很清楚,正在摸索。我觉得可能是加入标准品进行绝对定量吧
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发表于 2015-1-2 14:44:19 | 显示全部楼层
你是做miRNA吧?我用天根的逆转录kit,跑出来循环数较高,25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲,QIANGEN的更好一点,进口的,贵。。。
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 楼主| 发表于 2015-1-2 19:07:43 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧?我用天根的逆转录kit,跑出来循环数较高,25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲,QIAN ...

thanks. 确实是miRNA. 看过相应文献有用Qiangen的,还有Takara。第一个如您所说,贵,第二个公司逆转录的停产了。不过谢谢分享,谢谢
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 楼主| 发表于 2015-1-2 19:08:56 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧?我用天根的逆转录kit,跑出来循环数较高,25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲,QIAN ...

thanks. 确实是miRNA. 看过相应文献有用Qiangen的,还有Takara。第一个如您所说,贵,第二个公司逆转录的停产了。不过谢谢分享,谢谢
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发表于 2015-1-5 19:47:50 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧?我用天根的逆转录kit,跑出来循环数较高,25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲,QIAN ...

能不能交流一下?你做exosome的mirna定量pcr所用的外参是什么?有用cel-mir-39的,这个是要在提取rna的时候另外加进去吗还是?
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发表于 2015-1-7 10:20:01 | 显示全部楼层
muyujun123 发表于 2015-1-5 19:47
能不能交流一下?你做exosome的mirna定量pcr所用的外参是什么?有用cel-mir-39的,这个是要在提取rna的时 ...

外参?不知道还需要这个东西啊。。。我只用了内参
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发表于 2015-1-8 20:03:27 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-1-7 10:20
外参?不知道还需要这个东西啊。。。我只用了内参

内参?用的u6吗?但是我看文献里说,exosome里面的mirna是要用外参的啊,exosome里有u6吗?
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发表于 2015-1-9 09:22:37 | 显示全部楼层
muyujun123 发表于 2015-1-8 20:03
内参?用的u6吗?但是我看文献里说,exosome里面的mirna是要用外参的啊,exosome里有u6吗? ...

你有相关文献么?可以贴出来分享一下~我对这方面内容目前了解的不多,就以U6作为内参的,是可以跑出来的。设置外参的目的是什么呢?
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发表于 2015-1-10 16:22:12 | 显示全部楼层
muyujun123 发表于 2015-1-8 20:03
内参?用的u6吗?但是我看文献里说,exosome里面的mirna是要用外参的啊,exosome里有u6吗? ...

我也想了解这方面的知识,可以分享下相关文献吗?谢谢哦
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