第一次超离心WB结果，求大神帮忙看一看

dengsilong1991

小孔加油 发表于 2016-6-22 20:35
请问您一次超离多少培养基得到的外泌体，才能保证做western的量？谢谢！

我也才超离过三次，前两次是60ml离心，80ul溶解，直接loading buffer煮后，10ul上样，能见条带

小孔加油

请问您是80ul PBS重悬外泌体后，直接加loading 煮的，没有经过裂解液提取蛋白那一步吗？

小孔加油

请问您一次超离多少培养基得到的外泌体，才能保证做western的量？谢谢！

陆峰彬

hzangs 发表于 2016-5-27 15:34
你不杂cell lysis  
就好比告诉我你发现一堆水果里有几个水果是坏了， 而你不告诉这一堆水果总共有多少个 ...

请问版主你怎么保证外泌体和细胞上的蛋白量相同，BCA不是很精确，内参选什么？

dengsilong1991

恩，好的，我这次离心把cell也带上，谢谢前辈！

hzangs

dengsilong1991 发表于 2016-5-27 15:19
因为是第一次超离，我的培养基还是多次收集的，想看看离心所得物怎么样。cell lysis的对照可以反应分离的 ...

你不杂cell lysis  
就好比告诉我你发现一堆水果里有几个水果是坏了， 而你不告诉这一堆水果总共有多少个。
如果只有10个果子， 几个坏了 那确实说明有问题。如果数千个果子 只有几个坏了， 那没事啊。

如果你杂cell lysis   和exosomes样品上同样的蛋白量。  发现 阴性marker在cell lysis里已经过曝了，而exosomes样品里只有一点点， 那就说明 你的污染不是很重， 直接忽视就好。 而如果两者接近，那就说明污染很严重，样品不能当做exosomes样品了。

hzangs

dengsilong1991 发表于 2016-5-27 15:19
因为是第一次超离，我的培养基还是多次收集的，想看看离心所得物怎么样。cell lysis的对照可以反应分离的 ...

这个我不太清楚。  你最好还是要杂一下 cell lysis    这样才能大概反映出 你的样品里 不是exosomes的组分影响大概有多大。  不然 你这个没办法评判啊……

dengsilong1991

hzangs 发表于 2016-5-26 20:12
你这个怎么没有 cell lysis的对照……   没有细胞对照   不好讲啊……

因为是第一次超离，我的培养基还是多次收集的，想看看离心所得物怎么样。cell lysis的对照可以反应分离的exo的纯度吗？分离的exo的阴性marker要怎样才能除去呢？请前辈赐教。

hzangs

你这个怎么没有 cell lysis的对照……   没有细胞对照   不好讲啊……