外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

 找回密码
 立即注册
查看: 8105|回复: 16
打印 上一主题 下一主题

外泌体提RNA浓度很低,qPCR循环数35左右,曲线良好,但觉...

[复制链接]

8

主题

45

帖子

230

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
230
跳转到指定楼层
楼主
发表于 2016-7-11 10:41:00 | 显示全部楼层 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
如题,像大家所反映的外泌体RNA浓度低,大概20~ 50ng/μL ,A260/A280 1.2~1.7左右,做过好几次,但每次qPCR 循环数都30以上,老师说量太少,A260/280低说明不纯,反转录cDNA量不一致,不能说明问题,大家有什么更好的解决方案么?最近尝试加大上清量试一试。欢迎交流~
回复

使用道具 举报

8

主题

45

帖子

230

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
230
沙发
 楼主| 发表于 2016-7-13 11:09:35 | 显示全部楼层
grapetian 发表于 2016-7-11 19:31
你好 我想问你们是用什么提rna?我想提细胞培养上清外泌体的rna用哪个试剂盒比较好?还是直接提exosome后 ...

天根的比较好,101bio 提外泌体RNA 的产量是100μL 外泌体 RNA 产量50~100ng,远远不够,其他试剂盒我不知道,我觉得不需要试剂盒,天根比较彻底。
回复 支持 反对

使用道具 举报

8

主题

45

帖子

230

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
230
板凳
 楼主| 发表于 2016-7-13 11:13:33 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2016-7-11 10:52
用10-20ul 水重悬, 浓度尽量保证在100ng/ul   
因为浓度低 所以260/280的值不是很正常,因此这个比值可以 ...

恩,我这次上清液250ml试一下,还有我用的U6为内参,逆转录试剂盒是bio-rad 的,SYBR GREEN 是赛默飞的,这些性能好么?
回复 支持 反对

使用道具 举报

8

主题

45

帖子

230

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
230
地板
 楼主| 发表于 2016-8-12 17:58:43 | 显示全部楼层
完颜云裳 发表于 2016-8-10 23:36
楼主后面加大上清量结果有改善吗?我跑的结果也是这样,关键是U6也到了30几个循环了 ...

加大上清有改善,真的,因为我们样本量太小了,能养多少细胞别客气,尽量养,多收上清,他们上清用得比较少做出来是因为有一些是分泌型细胞,我的是一般肿瘤细胞,这次是100ml 收的U6 循环数22左右
回复 支持 反对

使用道具 举报

关闭

站长推荐上一条 /1 下一条

QQ|Archiver|手机版|外泌体之家 | exosomes & microvesicles  

GMT+8, 2024-5-13 07:51 , Processed in 0.183041 second(s), 24 queries .

Powered by Discuz! X3.3

© 2001-2017 Comsenz Inc.

快速回复 返回顶部 返回列表