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做外泌体RNA的注意了!即使去除外泌体的血清也可能干扰...

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发表于 2016-8-17 16:28:17 | 显示全部楼层 |阅读模式
做外泌体RNA的注意了!

即使去除外泌体的血清也可能干扰你细胞外泌体的RNA组成!!

胎牛血清(FBS)已在真核细胞培养中使用了几十年了。然而,很少有人关注FBS的RNA对培养的细胞会产生什么样的生物学效应。来自哈佛医学院的研究人员用RNA测序,证明了FBS含有蛋白质编码和调控的多种RNA,包括mRNA、miRNA、rRNA和snoRNA等。它们中的大多数(>70%)仍然存在于细胞外囊泡(EV)和细胞间通讯研究中常使用的长时间超速离心得到的无囊泡FBS(vesicle-depleted FBS, vdFBS)中。FBS相关的RNA会在分离细胞外膜泡RNA(exRNA)时一同被分离出来,这会对下游RNA分析造成干扰。许多进化上保守的FBS源的RNA种类会被错误地认为是人或小鼠细胞的转录本。值得注意的是,在FBS中含量丰富的一些miRNAs,如miR-122、miR-451A和miR-1246,先前已被报道为在培养细胞来源的细胞外膜泡中富含的miRNAs,这可能是胎牛血清中miRNAs造成的假象。对公开可用的exRNA数据库的分析支持FBS污染的概念。此外,FBS转录本可被培养的细胞吸收,并影响高度敏感的基因表达谱技术的结果。因此,实验设计过程中采取减少FBS源RNA干扰的预防措施是非常有必要的。
参考文献:
Wei, Z., et al. (2016). "Fetal Bovine Serum RNA Interferes with the Cell Culture derived Extracellular RNA." Sci Rep 6: 31175.
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发表于 2016-8-18 14:19:25 | 显示全部楼层
我做过肠癌细胞exosomes RNA测序,1246含量的确很高。
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发表于 2016-8-17 17:02:01 | 显示全部楼层
我就是做Exosomes RNA的,看到这个好激动
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发表于 2016-8-17 17:02:53 | 显示全部楼层
辛苦了,真的辛苦了,大有收获
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发表于 2016-8-17 22:42:34 | 显示全部楼层
换言之,这个mRNA 会不会对细胞的外泌体分泌产生影响?
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发表于 2016-8-18 10:46:43 | 显示全部楼层
来学习~~
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 楼主| 发表于 2016-8-18 10:57:31 | 显示全部楼层
Lightguider 发表于 2016-8-17 22:42
换言之,这个mRNA 会不会对细胞的外泌体分泌产生影响?

有这个可能性~
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发表于 2016-8-18 11:00:44 | 显示全部楼层
感谢分享 学习一下
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发表于 2016-8-18 15:05:36 | 显示全部楼层
还是做蛋白的好,没有这个担心,只要我把细胞用SILAC一标,有标记的必定是来自于细胞的~~~
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发表于 2016-8-18 17:08:01 来自手机 | 显示全部楼层
多谢。辛苦了,真的辛苦了
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