外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

 找回密码
 立即注册
查看: 217|回复: 13

跪求外泌体RNA的提取方法?

[复制链接]

10

主题

46

帖子

197

积分

注册会员

Rank: 2

积分
197
发表于 2016-11-23 10:11:14 | 显示全部楼层 |阅读模式
各位大神,你们都是怎么提取外泌体中的RNA的呢?用nanodrop能测出浓度吗?
回复

使用道具 举报

1

主题

62

帖子

629

积分

高级会员

Rank: 4

积分
629
发表于 2016-11-23 18:22:27 | 显示全部楼层
直接加trizol提
回复 支持 反对

使用道具 举报

10

主题

46

帖子

197

积分

注册会员

Rank: 2

积分
197
 楼主| 发表于 2016-11-23 19:00:23 | 显示全部楼层

那你用酒精沉淀了吗?我感觉到最后RNA都给整没了?
回复 支持 反对

使用道具 举报

0

主题

50

帖子

377

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
377
发表于 2016-11-24 04:44:55 | 显示全部楼层
我们实验室提microRNA,先用Trizol裂解,然后再用Ambion试剂盒提取。含量确实不高,不过real time-PCR够用了。
另外:你用多少exosomes?我们用8-10个T150 flasks的上清超离。
回复 支持 反对

使用道具 举报

10

主题

46

帖子

197

积分

注册会员

Rank: 2

积分
197
 楼主| 发表于 2016-11-24 14:42:56 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 04:44
我们实验室提microRNA,先用Trizol裂解,然后再用Ambion试剂盒提取。含量确实不高,不过real time-PCR够用 ...

我差不多用的是70ML细胞上清,只不过超离沉淀时我先用PBS 重悬起来了,没有直接TRIZOL裂解。这加trizol比例怎么定好呢?
回复 支持 反对

使用道具 举报

0

主题

50

帖子

377

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
377
发表于 2016-11-24 22:48:42 | 显示全部楼层
xiaodoudou 发表于 2016-11-24 14:42
我差不多用的是70ML细胞上清,只不过超离沉淀时我先用PBS 重悬起来了,没有直接TRIZOL裂解。这加trizol比 ...

我们实验室用的是35ml离心管,弃去上清后,加200ul Trizo就l可以铺满管底了。
回复 支持 反对

使用道具 举报

2

主题

56

帖子

284

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
284
发表于 2016-11-25 13:27:37 | 显示全部楼层
沉淀出Exosomes后用Trizol法提RNA时,建议使用糖原,可以促进核酸溶解,提高RNA得率
回复 支持 反对

使用道具 举报

10

主题

46

帖子

197

积分

注册会员

Rank: 2

积分
197
 楼主| 发表于 2016-11-28 11:15:45 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 22:48
我们实验室用的是35ml离心管,弃去上清后,加200ul Trizo就l可以铺满管底了。 ...

后期是用酒精洗沉淀,DEPC水溶解测浓度吗?
回复 支持 反对

使用道具 举报

10

主题

46

帖子

197

积分

注册会员

Rank: 2

积分
197
 楼主| 发表于 2016-11-28 11:17:48 | 显示全部楼层
wxz 发表于 2016-11-25 13:27
沉淀出Exosomes后用Trizol法提RNA时,建议使用糖原,可以促进核酸溶解,提高RNA得率 ...

您的意思是往DEPC水里加糖原吗?是什么原理啊?
回复 支持 反对

使用道具 举报

2

主题

56

帖子

284

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
284
发表于 2016-11-28 17:01:43 | 显示全部楼层
是用异丙醇沉淀RNA时加入糖原,糖原可以促进核酸的溶解
回复 支持 反对

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

关闭

站长推荐上一条 /1 下一条

QQ|Archiver|手机版|外泌体之家 | exosomes & microvesicles ( 沪ICP备14036105号-1

GMT+8, 2017-1-21 03:58 , Processed in 0.175370 second(s), 29 queries .

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.

快速回复 返回顶部 返回列表