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外泌体wb结果

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发表于 2017-8-13 20:23:09 | 显示全部楼层 |阅读模式
最近用60mL细胞上清液提取外泌体跑了一次wb,但是结果很奇怪,细胞刮取蛋白裂解后三个指标都出现了,而外泌体却一个都没有,这是什么原因?是我没提取成功,还是浓度太低,又或是其他什么原因,只能求助于大家

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发表于 2017-8-14 05:10:19 | 显示全部楼层
贴一下你的外泌体分离的流程。
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 楼主| 发表于 2017-8-14 09:09:51 | 显示全部楼层
kao3234659 发表于 2017-8-14 05:10
贴一下你的外泌体分离的流程。

400g 10min, 2000g 30min,10000g 30min,100000g 70min,取沉淀PBS洗涤,100000g 70min,取沉淀PBS重悬
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发表于 2017-8-14 09:18:34 | 显示全部楼层
想问下你样本超离之后有沉淀看到么?
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 楼主| 发表于 2017-8-14 10:24:23 | 显示全部楼层
只是睡着了 发表于 2017-8-14 09:18
想问下你样本超离之后有沉淀看到么?

有看到一点点的沉淀
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发表于 2017-8-15 08:40:24 | 显示全部楼层
请问你做WB的流程是什么呢?有加DTT吗
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 楼主| 发表于 2017-8-16 09:50:15 | 显示全部楼层
meiling 发表于 2017-8-15 08:40
请问你做WB的流程是什么呢?有加DTT吗

没加,直接加loading了
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发表于 2017-8-23 17:23:31 | 显示全部楼层
CARD 发表于 2017-8-16 09:50
没加,直接加loading了

我想请教的是:你超离用的是什么型号的离心机,rotor,和离心管?60ml一起离的么?
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发表于 2017-8-23 17:24:57 | 显示全部楼层
CARD 发表于 2017-8-16 09:50
没加,直接加loading了

我是新手,刚开始摸索提exosome的方法~望多指教
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 楼主| 发表于 2017-8-23 19:52:41 | 显示全部楼层
slxiang 发表于 2017-8-23 17:24
我是新手,刚开始摸索提exosome的方法~望多指教

贝克曼的,sw41ti
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