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请教各位大神!!提取间充质干细胞外泌体遇到的问题

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发表于 2018-10-5 20:55:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
     本人根据2006年提取那篇外泌体文献提取外泌体,用间充质干细胞200ml上清提取外泌体,最后一步离心后看不到沉淀, 然后用200ul的PBS反复冲管壁,得到200ul的重悬液,哪去测粒径,显示浓度太稀,测出的结果不稳定,然后wb也没做出结果,电镜还没做。   第二次用200ml上清提取的时候在第一次100000g*70min看到了沉淀,没有继续第二次100000G*70min ,并用200ulPBS重悬,拿去测粒径,结果显示粒径平均值在140nm左右,小于100nm的粒子很少。

  请教各位大神,是我的上清里面小于100nm的外泌体很少 吗?大部分是140nm的细胞外囊泡?
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发表于 2018-10-9 09:56:52 | 显示全部楼层
Jayden 发表于 2018-10-8 23:17
我在第2次100000g*70min超离完以后把离心管拿出来,在灯光下也没有看到沉淀,用的是Beckman的70Ti的转子 ...

没啥问题。  NTA数据  不同细胞系来源的外泌体粒径略有差异。  140nm可接受。  写文章的时候可以考虑称之为  EV 或者 small EV(sEV)
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发表于 2018-10-6 10:54:03 | 显示全部楼层
间充质干细胞的细胞外囊泡释放量很大。 超离后不要倒上清。要用移液器一点点小心翼翼的去掉上请。
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发表于 2018-10-6 15:26:00 | 显示全部楼层
间充质干细胞的细胞外囊泡释放量很大。 超离后不要倒上清。要用移液器一点点小心翼翼的去掉上请。
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发表于 2018-10-8 15:35:07 | 显示全部楼层
测粒径是用NTA吗,一般这种情况下粒径是会偏大的,140nm应该也正常吧,一般MSC外泌体会很多的
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 楼主| 发表于 2018-10-8 23:17:01 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2018-10-6 10:54
间充质干细胞的细胞外囊泡释放量很大。 超离后不要倒上清。要用移液器一点点小心翼翼的去掉上请。 ...

我在第2次100000g*70min超离完以后把离心管拿出来,在灯光下也没有看到沉淀,用的是Beckman的70Ti的转子,固定角转子,在离心之前在沉淀位置标记了的,用的是一次性的超速离心管,吸上清是用20ml针筒吸的,没有倒。您看我140nm粒径的分析报告能用吗?
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 楼主| 发表于 2018-10-8 23:18:19 | 显示全部楼层
caocao 发表于 2018-10-8 15:35
测粒径是用NTA吗,一般这种情况下粒径是会偏大的,140nm应该也正常吧,一般MSC外泌体会很多的 ...

是用的NTA,您觉得140nm粒径能用吗?
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发表于 2018-10-10 22:24:12 | 显示全部楼层
我觉得能用的,NTA检测粒径本身就是偏大的
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 楼主| 发表于 2018-10-11 20:51:43 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2018-10-9 09:56
没啥问题。  NTA数据  不同细胞系来源的外泌体粒径略有差异。  140nm可接受。  写文章的时候可以考虑称之 ...

好的,谢谢您的解答
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 楼主| 发表于 2018-10-11 20:52:15 | 显示全部楼层
caocao 发表于 2018-10-10 22:24
我觉得能用的,NTA检测粒径本身就是偏大的

好的,谢谢
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