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小白请问10万g第一次离心后,吸上清该怎么操作?

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发表于 2019-5-11 17:18:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
小白请问10万g第一次离心后,吸上清该怎么操作?还望各位大神指教一下!

论坛里大佬都说用吸,所以我上次超离之后,选择用1ml的枪头吸上清,吸到最后的时候小心翼翼但是还是感觉把外泌体吸走了,这次做wb并没有做出来,感觉不如一次性倒处理的好。现在特别想问问大家这个吸的操作到底怎么进行,使用1ml的枪吸还是用10ml的移液管吸?我的离心管大小是38.5ml的。底部该留多少液体呢??1ml还是200ul?求大神解答!
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 楼主| 发表于 2019-5-11 18:02:50 | 显示全部楼层
坐等大神回答
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发表于 2019-5-12 16:51:15 | 显示全部楼层

建议大家是从上面吸。但是如果你倒  也可以做出来。 那就没必要必须从上面吸啦
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 楼主| 发表于 2019-5-13 14:06:34 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2019-5-12 16:51
建议大家是从上面吸。但是如果你倒  也可以做出来。 那就没必要必须从上面吸啦 ...

大神,是用1ml的枪吸还是用10ml的移液管吸?感觉大枪的吸力比倒的吸力还大。。。
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发表于 2019-5-22 16:19:14 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2019-5-12 16:51
建议大家是从上面吸。但是如果你倒  也可以做出来。 那就没必要必须从上面吸啦 ...

请大神指教,离心3小时会不会太久,上次离心了3小时沉淀倒是很多,但是不能完全溶于PBS,蛋白浓度低,颗粒浓度不高,CD63的western条带也很弱,但是沉淀的条带里CD63比较强,请问你遇到过沉淀不溶的情况吗?有什么处理方法不?
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发表于 2019-5-22 19:08:17 | 显示全部楼层
exo-wang 发表于 2019-5-22 16:19
请大神指教,离心3小时会不会太久,上次离心了3小时沉淀倒是很多,但是不能完全溶于PBS,蛋白浓度低,颗 ...

如果你是正常的培养液体系, 基本上10万g  70min 就够了。  如果沉淀不容 可能是离心下来了一些杂质。  降低时间
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发表于 2019-5-23 14:27:34 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2019-5-22 19:08
如果你是正常的培养液体系, 基本上10万g  70min 就够了。  如果沉淀不容 可能是离心下来了一些杂质。   ...

好的,我再做一下看,谢谢大神
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发表于 3 天前 | 显示全部楼层
请问有BCA法测外泌体的步骤吗
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