外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

 找回密码
 立即注册
查看: 3344|回复: 19

本人使用life公司试剂盒提取血浆外泌体的RNA浓度

[复制链接]

4

主题

22

帖子

141

积分

注册会员

Rank: 2

积分
141
发表于 2016-3-10 00:39:58 | 显示全部楼层 |阅读模式
400ml血浆分离出的外泌体,
1、往外泌体沉淀中加入1ml Trizol,混匀(反复吹打或涡旋),4℃放置10min。
2、按比例(1ml Trizol:200ul氯仿)加入氯仿200ul,剧烈振荡,4℃放置15min。
4、4℃ 12000×g离心15min。
5、吸取上层水相至新EP管(350ml)。
6、按比例(1ml Trizol:500ul异丙醇)加入异丙醇500ul,混匀,4℃放置10min。
7、4℃ 12000×g 离心10min,弃上清,RNA 沉于管底。
8、按比例(1ml Trizol:1ml 75%乙醇)加入75%乙醇1ml,温和振荡。
9、4℃ 12000g 离心 5min,尽量弃上清(重复75%乙醇洗涤一次)。
10、室温晾干。
11、加用5ulRNA溶解液溶解沉淀RNA。


所测RNA浓度:50多ug/ml


回复

使用道具 举报

256

主题

1158

帖子

5500

积分

超级版主

Rank: 8Rank: 8

积分
5500
发表于 2016-3-10 19:12:35 | 显示全部楼层
楼主 400ul血浆吧?
回复 支持 反对

使用道具 举报

4

主题

22

帖子

141

积分

注册会员

Rank: 2

积分
141
 楼主| 发表于 2016-3-10 19:46:36 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2016-3-10 19:12
楼主 400ul血浆吧?

不好意思,打错了,是400ul。
感觉提取的RNA浓度比较低。后面用800ul提取的外泌体送去做高通量测序结果也差,说RNA浓度太低了
回复 支持 反对

使用道具 举报

2

主题

82

帖子

600

积分

高级会员

Rank: 4

积分
600
发表于 2016-3-13 21:30:55 | 显示全部楼层
life不是有专门的提取exosome RNA的试剂盒吗?有没有尝试下看看结果如何?exosome中RNA可按照细胞RNA提取步骤吗?会不会有影响?
回复 支持 反对

使用道具 举报

2

主题

17

帖子

272

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
272
发表于 2016-3-15 22:30:51 来自手机 | 显示全部楼层
用一般的试剂盒提取出的外泌体很难提到完整的外泌体,可通过颗径分析知道自己提出的是否完整,数量多少。
回复 支持 反对

使用道具 举报

4

主题

178

帖子

783

积分

高级会员

Rank: 4

积分
783
发表于 2016-3-21 10:05:32 | 显示全部楼层
50ug/ml,只用了5ul的水溶解?量这么少吗。新手问问
回复 支持 反对

使用道具 举报

3

主题

18

帖子

293

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
293
发表于 2016-5-11 15:09:41 | 显示全部楼层
楼主,血浆还是血清?
回复 支持 反对

使用道具 举报

4

主题

22

帖子

141

积分

注册会员

Rank: 2

积分
141
 楼主| 发表于 2016-5-19 16:47:02 | 显示全部楼层
zzy 发表于 2016-5-11 15:09
楼主,血浆还是血清?

用的血浆,最近在做血清的
回复 支持 反对

使用道具 举报

4

主题

22

帖子

141

积分

注册会员

Rank: 2

积分
141
 楼主| 发表于 2016-5-19 16:48:02 | 显示全部楼层
胖子的心境 发表于 2016-3-21 10:05
50ug/ml,只用了5ul的水溶解?量这么少吗。新手问问

确实好少,还在摸索中
回复 支持 反对

使用道具 举报

4

主题

22

帖子

141

积分

注册会员

Rank: 2

积分
141
 楼主| 发表于 2016-5-19 16:49:24 | 显示全部楼层
Bridgen桥生物 发表于 2016-3-15 22:30
用一般的试剂盒提取出的外泌体很难提到完整的外泌体,可通过颗径分析知道自己提出的是否完整,数量多少。 ...

检测了浓度和大小,还可以
回复 支持 反对

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

关闭

站长推荐上一条 /1 下一条

QQ|Archiver|手机版|外泌体之家 | exosomes & microvesicles ( 沪ICP备14036105号-1 

GMT+8, 2019-8-20 17:32 , Processed in 0.204110 second(s), 29 queries .

Powered by Discuz! X3.3

© 2001-2017 Comsenz Inc.

快速回复 返回顶部 返回列表