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大家都是用什么方法得到的exo中的RNA?

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发表于 2015-1-1 18:00:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
前段时间用Invetrogen的trizol 提RNA,全程无肉眼看见白色沉淀,最后浓度接近于纯水,有没有人可以来指点一下到底该如何成功提取exo的RNA?
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发表于 2015-5-6 02:22:50 | 显示全部楼层
wenzhouzsl 发表于 2015-5-1 20:38
您好,trizol提取外泌体RNA,浓度怎么样?
我没有做过,今天提了一次,最后加了10ul水,浓度只有21ng/ul ...

你好,我这里有篇文献,关于外泌体中RNA提取的,你看看吧,希望对你有帮助。http://www.jove.com/video/3037/isolation-and-characterization-of-rna-containing-exosomes
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发表于 2015-1-3 23:19:48 | 显示全部楼层
本人试过,trizol 法可以用来提外泌体的RNA的
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发表于 2015-5-1 20:38:37 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2015-1-3 23:19
本人试过,trizol 法可以用来提外泌体的RNA的

您好,trizol提取外泌体RNA,浓度怎么样?
我没有做过,今天提了一次,最后加了10ul水,浓度只有21ng/ul。260/280在1.5几,也不知道能不能反转,往下做?
下一步要测miRNA,有8个miRNA要茎环反转,不清楚这些个miRNA是否被包裹在exosome中,没有相关文献。反转时10ul体系加1ul 总RNA行吗?
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发表于 2015-5-3 22:17:54 | 显示全部楼层
wenzhouzsl 发表于 2015-5-1 20:38
您好,trizol提取外泌体RNA,浓度怎么样?
我没有做过,今天提了一次,最后加了10ul水,浓度只有21ng/ul ...

外泌体中RNA 含量不会很多,10ul水,浓度只有21ng/ul确实少了点,260/280在1.5几 说明提取不纯啊。

反转试试吧
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发表于 2015-5-6 09:01:51 | 显示全部楼层
谢谢您的帮助
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发表于 2015-5-7 21:32:02 | 显示全部楼层
我用trizol-ls提过,纯度也低(1.5),浓度30~40ng/ul(30ul),PCR U6的CT值27~28。即使看不到沉淀,也可试试
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发表于 2015-7-20 23:11:49 | 显示全部楼层
我来说说我的实验经验。
最开始,担心exosomes中的RNA含量较低,所以买了invitrogen的exosomes的RNA提取试剂盒,回来试了几次,几乎得不到RNA,后来索性用trizol提取,发现效果不错,需要注意的是trizol提取时尽量多exosomes,这样到最后RNA沉淀的时候你甚至可以隐约看到白色沉淀(这么干主要是保证实验更有把握)。依据我的经验100ml PC12细胞培养液超离获得的exosomes大约能够提取2至5微克的RNA。
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发表于 2015-7-20 23:49:28 | 显示全部楼层
ZYL2004 发表于 2015-7-20 23:11
我来说说我的实验经验。
最开始,担心exosomes中的RNA含量较低,所以买了invitrogen的exosomes的RNA提取试 ...

你是超速离心提的?Trizol?能否说下具体的方法
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发表于 2016-4-12 13:20:57 | 显示全部楼层
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