关于超速离心的方法

onlyrush · 发表于 2015-10-28 11:08:22

本帖最后由 onlyrush 于 2015-10-28 11:13 编辑

请问大家用超速离心纯化exosomes是完全按照“Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids“来的还是有所优化？
如果有优化的话是在那些方面？增加离心时间？加大离心力？
还有在离心过程中有否加入0.22um过滤这一步骤？是在什么时候加的？
或者是其他的更好的更被认可的方法？
谢谢。附流程图：

xiaodoudou · 发表于 2016-12-27 09:04:40

spencerliu 发表于 2016-3-30 21:27
但是外泌体本身直径很小，用0.22um的话，应该损耗比离心要低吧，理论上外体可以穿过0.22um的膜啊 ...

我也是这么觉的，而且是10000g离完心以后我都滤膜过滤一下。

北燕南飞 · 发表于 2016-12-16 09:12:08

我用这个方法超离的，最后得到白色沉淀，而不是大家所说的透明的胶状沉淀，楼主得到的外泌体沉淀是什么样的呀？

spencerliu · 发表于 2016-3-30 21:27:32

丝瓜发表于 2015-10-28 18:33
其实0.22 过滤的效果就是10000g离心的一样的，如果两个步骤都有的话，损耗量就比较大了。关键是GPC1那篇文 ...

但是外泌体本身直径很小，用0.22um的话，应该损耗比离心要低吧，理论上外体可以穿过0.22um的膜啊

spencerliu · 发表于 2016-3-30 21:27:16

丝瓜发表于 2015-10-28 18:33
其实0.22 过滤的效果就是10000g离心的一样的，如果两个步骤都有的话，损耗量就比较大了。关键是GPC1那篇文 ...

但是外泌体本身直径很小，用0.22um的话，应该损耗比离心要低吧，理论上外体可以穿过0.22um的膜啊

丝瓜 · 发表于 2015-10-28 18:33:30

其实0.22 过滤的效果就是10000g离心的一样的，如果两个步骤都有的话，损耗量就比较大了。关键是GPC1那篇文章后面的exo纯化是只用来做了流式么，之前质谱就是用超高速的么，怎么看文章都没讲清楚~~

熊胖 · 发表于 2015-10-28 18:10:11

我用的是GPC1+exo胰腺癌那篇文献的超离方法 800g和2000g后0.22um过滤，没有1wg离心，直接10w g 2h 两次

onlyrush · 发表于 2015-10-28 17:05:34

本帖最后由 onlyrush 于 2015-10-29 09:28 编辑

luckkit 发表于 2015-10-28 14:08
我们一般在2000g*10min后10000g*30min之前进行0.22um过滤。

0.22um过滤是去除细胞碎片残余，是否会损伤exosomes？
过滤和不过滤的效果有否比较过？

luckkit · 发表于 2015-10-28 14:08:09

我们一般在2000g*10min后10000g*30min之前进行0.22um过滤。

kasangzc · 发表于 2015-10-28 12:55:34

还想请教一下超滤步骤应该加到哪里？

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