关于PEG提取外泌体

小孔加油 · 发表于 2016-8-3 13:34:16

请问各位，PEG提取外泌体需要现用现配吗？配制好的PEG溶液怎么保存？

林剑邦 · 发表于 2016-8-3 19:09:49

楼主用PEG提取效果如何呀？杂蛋白多吗？

seallin · 发表于 2016-8-3 22:14:46

不需要现配现用，配完4000 g离心，0.22 um过滤后保存常温放置即可

小孔加油 · 发表于 2016-8-10 10:54:22

seallin 发表于 2016-8-3 22:14
不需要现配现用，配完4000 g离心，0.22 um过滤后保存常温放置即可

请问为什么要用4000g离心？不太明白。过滤是为了无菌吗？

seallin · 发表于 2016-8-10 12:51:22

小孔加油发表于 2016-8-10 10:54
请问为什么要用4000g离心？不太明白。过滤是为了无菌吗？

因为后续为了得到pellet要用低速离心，所以为了使得pellet里不含有PEG固体中存在的杂质，所以最好先离心，以提高pellet的纯度

小孔加油 · 发表于 2016-8-10 17:10:19

seallin 发表于 2016-8-10 12:51
因为后续为了得到pellet要用低速离心，所以为了使得pellet里不含有PEG固体中存在的杂质，所以最好先离心 ...

太感谢了！请问您有没有用PEG提取过的外泌体培养细胞？残留的PEG对细胞有损伤吗？

小孔加油 · 发表于 2016-8-10 17:32:38

林剑邦发表于 2016-8-3 19:09
楼主用PEG提取效果如何呀？杂蛋白多吗？

不好意思，我才刚开始，还没做到western那步

小孔加油 · 发表于 2016-8-11 08:08:10

seallin 发表于 2016-8-3 22:14
不需要现配现用，配完4000 g离心，0.22 um过滤后保存常温放置即可

请问4000g离心多长时间呢

seallin · 发表于 2016-8-14 21:48:08

小孔加油发表于 2016-8-10 17:10
太感谢了！请问您有没有用PEG提取过的外泌体培养细胞？残留的PEG对细胞有损伤吗？ ...

这我没试过，我估计会有点影响的. 最好还是用超离的外泌体培养细胞

原代中国好男人 · 发表于 2016-8-15 21:13:59

林剑邦发表于 2016-8-3 19:09
楼主用PEG提取效果如何呀？杂蛋白多吗？

这个方法杂蛋白应该是比较多吧，感觉还是梯度密度超速离心的方法比较好，但是感觉这技术好难！

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