做外泌体RNA的注意了！即使去除外泌体的血清也可能干扰...

土豆

做外泌体RNA的注意了！

即使去除外泌体的血清也可能干扰你细胞外泌体的RNA组成！！

胎牛血清（FBS）已在真核细胞培养中使用了几十年了。然而，很少有人关注FBS的RNA对培养的细胞会产生什么样的生物学效应。来自哈佛医学院的研究人员用RNA测序，证明了FBS含有蛋白质编码和调控的多种RNA，包括mRNA、miRNA、rRNA和snoRNA等。它们中的大多数（>70％）仍然存在于细胞外囊泡（EV）和细胞间通讯研究中常使用的长时间超速离心得到的无囊泡FBS（vesicle-depleted FBS, vdFBS）中。FBS相关的RNA会在分离细胞外膜泡RNA（exRNA）时一同被分离出来，这会对下游RNA分析造成干扰。许多进化上保守的FBS源的RNA种类会被错误地认为是人或小鼠细胞的转录本。值得注意的是，在FBS中含量丰富的一些miRNAs，如miR-122、miR-451A和miR-1246，先前已被报道为在培养细胞来源的细胞外膜泡中富含的miRNAs，这可能是胎牛血清中miRNAs造成的假象。对公开可用的exRNA数据库的分析支持FBS污染的概念。此外，FBS转录本可被培养的细胞吸收，并影响高度敏感的基因表达谱技术的结果。因此，实验设计过程中采取减少FBS源RNA干扰的预防措施是非常有必要的。

参考文献：

Wei, Z., et al. (2016). "Fetal Bovine Serum RNA Interferes with the Cell Culture derived Extracellular RNA." Sci Rep 6: 31175.

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hereissyk

我做过肠癌细胞exosomes RNA测序，1246含量的确很高。

片11

来学习！

kericnnoe1964

歐博集團成立於2014年，是亞洲新興博彩娛樂集團

maxcqh

学习了,我也是准备培养细胞的，不知道有没解决的好办法

zhaozhi

谢谢分享

yujili

感谢分享!!

CheungKL

分析的很棒，学习了

ZWei

我是这篇文章的作者。感谢大家对我们研究的认可！
个人认为培养基中的RNA是没办法去除的，除非某一天能研发出全部化学合成来源的培养基。此外，短期换成无血清培养基是洗不干净污染的（可以取1uL条件培养基走个PAGE胶就能看到很强的BSA条带）；而长期换成无血清培养基会对细胞状态造成很大影响。
个人建议对于in vitro的胞外RNA研究最好也测一下你的新鲜培养基，然后做个减法。例如我们的一项后续研究：
https://www.nature.com/articles/s41467-017-01196-x

XueqingMa

谢谢分享

JCai

谢谢分享

陈福浩

谢谢分享