Qiagen和密理博提取的外泌体加入细胞后引起免疫细胞的活化

原代中国好男人 · 发表于 2016-8-24 23:50:39

我们是研究免疫相关的，现在市面上的盒子用Qiagen和密理博的外泌体提取试剂盒，提取物加入细胞后直接将细胞激活了，导致实验失败，难道真的只能用超速离心的方法么？各位大神有知道解决方法的么？如何能不让我的细胞激活，是试剂盒中Buffer的问题吗？

hzangs · 发表于 2016-8-28 12:27:05

本帖最后由 hzangs 于 2016-8-28 12:28 编辑

密理博的超离kit是基于超滤方法的那个么？密理博的kit 我没尝试过，但是有过一些了解。他们使用了10KD的超滤管进行外泌体制备。这个过程的确会截流外泌体，得到含有外泌体的样品，但是这个过程同样会有很多10KD以上的蛋白被截流，其实血清或者细胞分泌蛋白还是很多大于10KD的。 qiagen使用了膜亲和的方法，我翻看过他们的很多公开资料，这个膜应该也会非特异性的结合一些的杂蛋白。
综上所述，你的这个免疫细胞活化，有可能是杂蛋白的影响。当然，这只是一种猜测，毕竟不了解你的实验背景。希望对你有所帮助。

yizhizi · 发表于 2016-8-25 16:39:00

同求超离提取血清中外泌体的稳定技术方案。。。

原代中国好男人 · 发表于 2016-8-25 14:43:02

没做，就是超离太难做了，条件不允许

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Qiagen和密理博提取的外泌体加入细胞后引起免疫细胞的活化

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