新鲜出炉的电镜求鉴定

grapetian · 发表于 2016-9-20 17:29:10

请大神们帮我鉴定下电镜图，为什么我同一个样品做出来的囊泡大小都有，30nm-150nm不等,还有几个200nm左右的。形态也各异，什么样的都有。样品是细胞上清液超离得到的。另外背景也不干净，电镜老师说是蛋白污染。还有丝状的不知道是什么？

陈陈陈Rachel · 发表于 2016-10-14 12:08:01

楼主的电镜图好棒啊我的电镜图感觉看不到外泌体

我想请教一下第一次100000g离心之后弃上清是直接用加样枪吸干么就是液体全部都吸走么还有再加入PBS还要混匀吗求告知

dancing · 发表于 2016-10-14 10:39:29

Odie 发表于 2016-9-24 12:46
估计你用的离心法测的吧。会有很多细胞碎片等杂质（提取试剂盒本人测试效果不错，大小比较均一），制样的时 ...

请问你用的什么牌子的提取试剂盒，我用试剂盒提取的杂蛋白很多，拍电镜背景很难看

grapetian · 发表于 2016-10-11 13:34:09

我都是用枪吸干的

五仁 · 发表于 2016-10-10 13:54:25

grapetian 发表于 2016-10-10 13:14
不是啊，你离心的话肯定是pbs要加满超离管的，最后一步是加20-30ul重悬后做鉴定 ...

是的，就是这个加20到50微升PBS鉴定，在这之前，管壁内的液体倒掉，但还是里边还是有液体啊，PBS重悬pellet，吸出来可能就100微升了。

grapetian · 发表于 2016-10-10 13:14:12

五仁发表于 2016-10-9 23:33
楼主超速离心的时候，最后用pbs重悬，我看文献上说用20微升到50微升经行，但是原本离心管壁上就有液体，怎 ...

不是啊，你离心的话肯定是pbs要加满超离管的，最后一步是加20-30ul重悬后做鉴定

五仁 · 发表于 2016-10-9 23:33:35

楼主超速离心的时候，最后用pbs重悬，我看文献上说用20微升到50微升经行，但是原本离心管壁上就有液体，怎么处理？50微升的PBS加入到那么大的超速离心管中，就和大海捞针一样，怎么重悬？感谢楼主能够排疑

小七果果8 · 发表于 2016-10-1 10:46:35

请问如果暂时没有100000g的离心机可以用，后面几步用8000g的是不是完全没有意义，根本不可能提出外泌体，求助~

中义 · 发表于 2016-9-29 12:49:08

应该在去上清时彻底一点，留上清时保守一点，这样有助于减少蛋白污染。

grapetian · 发表于 2016-9-26 12:37:14

Odie 发表于 2016-9-24 12:46
估计你用的离心法测的吧。会有很多细胞碎片等杂质（提取试剂盒本人测试效果不错，大小比较均一），制样的时 ...

对啊我用的超离，你用什么试剂盒提取的？

grapetian · 发表于 2016-9-26 12:24:08

jzhou65 发表于 2016-9-24 00:11
请问您具体是怎么提取的啊？谢谢！

超速离心法提取的收集细胞培养上清，300g 10min 2000g 20min 10000g 30min 100000g 1h, pbs洗一遍 100000g 1h

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