外泌体蛋白浓度问题

我是小白 · 发表于 2016-12-8 21:32:31

用超速离心法提取血清中外泌体后，pbs重悬。在测蛋白和蛋白变性的过程中需要加入裂解液吗？目前我自己一直未加裂解液，向加过裂解液的同志学习一下经验.

WinterBlinder · 发表于 2021-5-16 20:40:28

学习学习

zhangchao · 发表于 2020-7-19 22:59:04

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-9 23:08
大鼠原代胶质细胞来源的外泌体，100ml无血清培养基，24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬，BCA定蛋白 ...

请问只加RIPA裂解液么，不加其他的抑制剂什么的么？ 50ulRIPA和待测的外泌体是多少比例呀？

DBLB · 发表于 2019-10-11 19:14:35

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-9 09:52
如果准备做western，弃去上清后，我直接用加入RIPA裂解液，冰上裂解10分钟后，BCA法测浓度。 ...

您好，请问一下您用的是哪一种RIPA裂解液，BCA测出来浓度大概是多少，有没有试过超声的方法来裂解

ronaldchen · 发表于 2018-1-15 19:38:24

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-15 01:57
弃上清这一步确实要小心，慢慢操作。
你是所有marker都没做出来，还是只有CD63没做出来？ ...

刚做出来了CD63, 吸的时候留了很多上清，才做出来的。
这样外泌确保在，不过上清留得太大，杂蛋白也太多。
不知道您是怎么弃上清的呢？是吸还是倒呢？还是会留一点？

ronaldchen · 发表于 2018-1-15 14:10:27

CD63，其他的marker还没有到货，CD63用的和你一样的抗体。
我在想可能是吸的时候，很难避免吸掉了。是不是倒好些？我用的水平转头。
或者说用真空泵吸

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-1-15 01:57:49

ronaldchen 发表于 2018-1-13 23:12
我没做出来，不知道是不是吸的时候把外泌体弄丢了...

弃上清这一步确实要小心，慢慢操作。
你是所有marker都没做出来，还是只有CD63没做出来？

ronaldchen · 发表于 2018-1-13 23:12:13

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-13 00:03
CD63, flotilin, tsg101
CD63用的是Santa Cruz的抗体，还可以。Smear大小在50-70Kda之间 ...

我没做出来，不知道是不是吸的时候把外泌体弄丢了...

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-1-13 00:03:50

ronaldchen 发表于 2018-1-12 14:45
请问你做的marker是？ CD63好做么？

CD63, flotilin, tsg101
CD63用的是Santa Cruz的抗体，还可以。Smear大小在50-70Kda之间

ronaldchen · 发表于 2018-1-12 14:45:27

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-9 23:08
大鼠原代胶质细胞来源的外泌体，100ml无血清培养基，24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬，BCA定蛋白 ...

请问你做的marker是？ CD63好做么？

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