用于exosome提取的无血清培养基怎么制备？

yy8651 · 发表于 2015-4-23 17:18:27

之前记得在哪里看过版主说过去exosome血清的制备方法，具体细节还是不清楚，有哪位做过了吗？

血清20%+培养基80%稀释之后，0.22微米滤器过滤，高速离心11000g*4小时这样就可以了吗？

下里巴人 · 发表于 2016-7-22 11:08:57

yy8651 发表于 2015-4-28 13:45
超速离心之后是否需要鉴定血清中是否还残存exosome？
超离之后，血清底部会有一层层的悬浮物，吸取时需要丢 ...

有答案了吗？

下里巴人 · 发表于 2016-7-22 11:07:52

”超速离心之后是否需要鉴定血清中是否还残存exosome？
超离之后，血清底部会有一层层的悬浮物，吸取时需要丢弃多少？“
这个问题没人回答吗？望各位不吝赐教！

vincent · 发表于 2016-7-11 08:45:06

luckkit 发表于 2015-12-22 05:18
我们做过Nanosight，绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进 ...

你好，nanosight的宝贵经验可否分享一下。我也打算在实验设计里面加入。但是还没具体认识448326307@qq.com。万谢

stones · 发表于 2016-6-22 09:52:49

luckkit 发表于 2015-12-22 05:18
我们做过Nanosight，绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进 ...

也想尝试一下MSC能否用无血清培养后提取exo，请问你培养的是什么细胞呢？

子非鱼 · 发表于 2015-12-23 14:10:56

yy8651 发表于 2015-4-23 18:59
非常感谢，那我打算离心12小时。离心力多大呢？11000g是否足够？

你少了一个0

zierzier · 发表于 2015-12-23 11:01:12

请问大家，对血清进行超离处理去除外泌体，如何保证血清不被污染呢？

hzangs · 发表于 2015-12-23 09:42:06

luckkit 发表于 2015-12-22 05:18
我们做过Nanosight，绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进 ...

有些细胞对血清饥饿的耐受情况比较好，所以在无血清培养基的培养下发生凋亡的时间会比较晚，因此还是可以分到exosome。只是有些细胞可能确实会收不到exosome了

luckkit · 发表于 2015-12-22 05:18:04

liuhaoisboy 发表于 2015-12-9 21:42
这样提出来的"外泌体"应该值得商榷

我们做过Nanosight，绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进行了WB验证，Markers和阴性对照均符合预期。

liuhaoisboy · 发表于 2015-12-10 11:42:31

yy8651 发表于 2015-12-10 11:38
我认为这种方法提取所得大部分是凋亡小体

这样提出来的"外泌体"应该值得商榷

yy8651 · 发表于 2015-12-10 11:38:34

liuhaoisboy 发表于 2015-12-10 11:26
大家都知道不同细胞、不同状态、不同环境分泌的外泌体有所不同。你这样不给细胞完全的生长环境，提取的外 ...

我认为这种方法提取所得大部分是凋亡小体

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