用超速离心法从血浆提取外泌体

wchuanlin

新手，问一下你们用超速离心从血浆中提取外泌体都是参考的哪篇文献啊，能给个protocol吗，谢谢

dt289343712

超速离心时，转子和离心管的选择是否会影响外泌体的得率？我用1-3mL血浆超速离心100000g 70min*2，由于没有小离心管，只能PBS稀释至38mL，感觉得率很低，看不见沉淀，marker只有TSG101能跑出来，CD9，CD81，CD63都不行，而用peg沉淀法，所有的marker都很亮。

JKF

血清怎么分离 我最近也在用超离分离血清外泌体。 请问超速离心提取小鼠血清外泌体大概需要多少的血清呢，我今天用了将近1毫升的血清，PBS补齐到13.2毫升， 100000g离心力离心两次，每次70分钟，最后沉淀看不到

ronaldchen

Bruce 发表于 2018-1-13 23:55
由于文献读的早，前面提到的文章并没有超离血浆分离外泌体。多谢上面战友提醒！
这里有一个protocol或许可 ...

这个很好   

Bruce

由于文献读的早，前面提到的文章并没有超离血浆分离外泌体。多谢上面战友提醒！
这里有一个protocol或许可供参考：
https://www.nature.com/protocolexchange/protocols/5541#/procedure

Bruce

ronaldchen 发表于 2018-1-13 23:13
这篇文章里面血浆根本没有超离     仔细看看文章，只有培养上清都做了

是的，对于血浆exosomes的分离该文只是比较了precipitation和SEC的方法。由于我们只是做的conditioned medium，文献读的早，记混了。

ronaldchen

Bruce 发表于 2018-1-12 23:54
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26194179
此文比较了ultracentrifugation、ultrafiltration、density ...

这篇文章里面血浆根本没有超离     仔细看看文章，只有培养上清都做了

baishixiaoyaozi

ronaldchen 发表于 2018-1-12 14:42
这篇文章里面的血浆不是用超速离心分离的，

六楼给的链接就是这篇文章。

wchuanlin

Bruce 发表于 2018-1-12 23:54
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26194179
此文比较了ultracentrifugation、ultrafiltration、density ...

非常感谢

Bruce

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26194179
此文比较了ultracentrifugation、ultrafiltration、density gradient centrifugation以及size exclusion chromatography (SEC)等方法从培养上清和血浆中分离exosomes的效果。希望有所帮助。

wchuanlin

ronaldchen 发表于 2018-1-12 14:50
Sharma, S., et al. (2018). "Methods to Enrich Exosomes from Conditioned Media and Biological Fluids. ...

非常感谢