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【投稿经验】审稿人对SBI试剂盒的疑问及解决

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发表于 2016-7-4 09:34:01 | 只看该作者 回帖奖励 |正序浏览 |阅读模式
本帖最后由 惜名 于 2016-7-4 09:35 编辑

本人正在投一篇Scientific Reports(水刊,求大神不要嘲笑)
用SBI试剂盒提取的exo,审稿人针对这个方法提出了如下comments,分享给各位群里的战友:

In Fig. 1, western blot analysis was performed using cell lysates and exosome lysates as starting materials. However, purified exosomes, especially if a polymer-based extraction kit such as the Exo-Quick kit is used, are heavily contaminated with carry-over proteins and cell debris from the initial DC culture media. Therefore, the authors should add a control were the same exosome samples are first digested with proteinase K to eliminate extra-exosomal contaminants and then lysed and used for western blot analysis. This control would help determine whether the indicated markers are of exosomal origin or not.  




补实验中。。。都毕业了还要给自己擦屁股,唉。。。
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发表于 2017-10-19 23:38:19 | 只看该作者
惜名 发表于 2016-10-21 17:18
这个我也不知道,哈哈

100 μg/ml of proteinase K at 37°C for 30 min to remove surface proteins
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4895447/
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发表于 2017-7-22 15:43:08 | 只看该作者
LarryYang 发表于 2017-3-16 13:04
版主,你好!我也用SBI试剂盒提培养基的外泌体,根据他提供的protocol来的,但是做WB几个标志蛋白都做不出 ...

后来做出来了吗?我遇到了相同的问题
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发表于 2017-3-16 13:04:39 | 只看该作者
版主,你好!我也用SBI试剂盒提培养基的外泌体,根据他提供的protocol来的,但是做WB几个标志蛋白都做不出来,求指教!!!
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发表于 2016-10-25 09:49:43 | 只看该作者
求蛋白酶K经验
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 楼主| 发表于 2016-10-21 17:18:08 | 只看该作者
我是小白 发表于 2016-10-20 12:03
请问版主,对于蛋白酶K的量控制,或者是具体的操作过程如何做呢?如果加入Triton-100行不行呢?有没有文献 ...

这个我也不知道,哈哈
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发表于 2016-10-20 12:03:40 | 只看该作者
请问版主,对于蛋白酶K的量控制,或者是具体的操作过程如何做呢?如果加入Triton-100行不行呢?有没有文献支持呢?求分享
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发表于 2016-10-11 18:46:27 | 只看该作者
惜名 发表于 2016-8-27 09:30
用PBS保存,如果短期内用,我会放在-40度(这个冰箱在实验室里,比较方便)。如果比较长期保存,放在-80 ...

谢谢啦
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 楼主| 发表于 2016-8-27 09:30:32 | 只看该作者
空谷跫音 发表于 2016-7-26 22:45
大神,我也用跟你一样的试剂盒提的外泌体,请问你提完后怎么保存外泌体的,放在什么溶液里?杂志蛋白含得多 ...

用PBS保存,如果短期内用,我会放在-40度(这个冰箱在实验室里,比较方便)。如果比较长期保存,放在-80堵(这个冰箱在地下室,取用麻烦)。我个人经验,如果是几天之内用的,放在-40肯定没问题~做细胞功能干预、染色标记、蛋白、RNA等都没问题
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发表于 2016-7-26 22:45:47 | 只看该作者
大神,我也用跟你一样的试剂盒提的外泌体,请问你提完后怎么保存外泌体的,放在什么溶液里?杂志蛋白含得多吗,后续好进行吗?谢谢
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