PKH67染色的疑惑

LQLQLQ · 发表于 2016-8-10 14:45:23

各位大神，我按说明书用Pkh67染的exosome，然后等体积1%BSA终止，然后100000g，70mins离心得到沉淀，但是这个沉淀既有exosome也有剩余的染料，我用PBS重悬沉淀再用它处理细胞，但是在共聚焦显微镜下观察，发现沉淀下来的剩余染料把细胞也都染上颜色了，导致exosome和细胞都成绿色，鉴别不开了，各位遇到过这种情况吗？怎么解决的，多谢大家了！！

LQLQLQ · 发表于 2016-8-13 13:31:42

wooway 发表于 2016-8-12 09:54
我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题！我用o.22um的滤头过滤之后就没事了！你可以把你染好的外泌体 ...

恩，好的，太感谢你了！！

LQLQLQ · 发表于 2016-8-11 09:33:23

Johnny 发表于 2016-8-10 16:50
这个沉淀既有exosome也有剩余的染料是怎么区分的？

没法区分，只是一些沉淀贴在管底，沉淀量明显比我之前提的exosome沉淀多，然后再用这些沉淀处理细胞，细胞膜都被染上色了

wooway · 发表于 2016-8-12 09:54:08

我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题！我用o.22um的滤头过滤之后就没事了！你可以把你染好的外泌体滴到玻片上拿到荧光显微镜下观察，一般多于的染料都是大颗粒的！

LQLQLQ · 发表于 2016-8-13 13:30:22

Johnny 发表于 2016-8-11 10:22
染料怎么可能有那么多。。。肉眼可见的量？

对，黄色的沉淀贴在管底，不多，但是肉眼可见

崔雪娇123 · 发表于 2017-5-5 20:58:55

wooway 发表于 2016-8-12 09:54
我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题！我用o.22um的滤头过滤之后就没事了！你可以把你染好的外泌体 ...

请教一下，您用0.22um的滤头滤的是荧光染料吗

JKF · 发表于 2018-1-22 20:53:30

wooway 发表于 2016-8-12 09:54
我是用其他的染料但是也遇到了和你一样的问题！我用o.22um的滤头过滤之后就没事了！你可以把你染好的外泌体 ...

请问重新超离之后可以看到沉淀吗

15626422377 · 发表于 2020-8-30 22:47:47

版主最后怎么处理的？我现在也遇到同样的问题啊！！！求救！！！

yxyyjs · 发表于 2021-2-25 16:53:07

同样求助，染完pkh26，再次上10万g离心，竟然能看到沉淀，想不通，多余染料也被离心下来了吗？

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