超速离心法分离血清

我是小白

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-23 07:10
根据我们实验室的结果，人血清EV含量大约为10的11－12次方／毫升，超离后（100000xg，2小时）大概还有40 ...

请问有提取血清的超速离心法的protocol吗？我自己也找了好多步骤，不知道用哪一个？

baishixiaoyaozi

july 发表于 2016-11-24 12:26
怎么证明还留下了40%呢？

我们用NTA检测不同组分中exosome含量

baishixiaoyaozi

我是小白 发表于 2016-11-24 17:44
请问有提取血清的超速离心法的protocol吗？我自己也找了好多步骤，不知道用哪一个？ ...

我们实验室用两步离心，10000xg，30分钟，去除micro vesicles。100000-150000xg，2小时。

yanhen521

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 22:45
我们实验室用两步离心，10000xg，30分钟，去除micro vesicles。100000-150000xg，2小时。 ...

请问超离500ul血浆样本，配平时加多少PBS定容？因为血浆比较稠厚，需要充分的稀释。

baishixiaoyaozi

yanhen521 发表于 2017-4-20 10:56
请问超离500ul血浆样本，配平时加多少PBS定容？因为血浆比较稠厚，需要充分的稀释。 ...

我们实验室一般1：1稀释。我们用的超速离心机比较小，300微升/离心管。

八戒在五湖

你好，我想问一下你的血浆是加了抗凝处理的还是没加抗凝的啊，没加的可以提么

lyy2410

请问离下来的沉淀长什么样，是在试管底部还是壁上？什么颜色?谢谢

jrr

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 22:45
我们实验室用两步离心，10000xg，30分钟，去除micro vesicles。100000-150000xg，2小时。 ...

请问纯度如何，要不要再超滤

baishixiaoyaozi

jrr 发表于 2017-12-6 19:22
请问纯度如何，要不要再超滤

说实话，纯度不是太好。我跑胶，做过考染，还是有很多血清蛋白（50-70 kDa之间，以及100kDa以上）。
我没有试过超滤。

ronaldchen

baishixiaoyaozi 发表于 2017-12-6 20:59
说实话，纯度不是太好。我跑胶，做过考染，还是有很多血清蛋白（50-70 kDa之间，以及100kDa以上）。
我没 ...

你做过western么，谢谢