超滤浓缩加超速离心提取外泌体遇到问题，求大神指导

pytruth

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-26 02:34
8管，每管11mL，不算少了。超离后每管加1mL PBS清洗，然后合并再离心，最后加适量裂解液。我们实验室用的 ...

11ml看不见沉淀，怎么冲呢？你是什么细胞？你试过离11ml吗，能看见沉淀吗？30ml离心能看见沉淀吗？

tylz1985

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-26 02:34
8管，每管11mL，不算少了。超离后每管加1mL PBS清洗，然后合并再离心，最后加适量裂解液。我们实验室用的 ...

这样提取的外泌体应该包含了很多杂质蛋白，是吗？

baishixiaoyaozi

pytruth 发表于 2016-12-26 12:35
11ml看不见沉淀，怎么冲呢？你是什么细胞？你试过离11ml吗，能看见沉淀吗？30ml离心能看见沉淀吗？ ...

我用120ml超离，看不见沉淀，第一次离心后，每管加5ml PBS重悬，合并后再离心，最后加裂解液。可以检测到exosomal markers。

baishixiaoyaozi

tylz1985 发表于 2016-12-26 13:06
这样提取的外泌体应该包含了很多杂质蛋白，是吗？

如果用含血清的培养基，可能包含杂蛋白比如serum albumin。无血清培养基会好很多。