PKH26和PKH67标记

Aurorachen

请问可以将染色后的EXO注入小鼠体内，处死制成冰冻切片，免疫荧光观察吗？

ytxing

您好，想向您请教一下，PKH26只只能染细胞膜吗？因为我看说明说PKH26是亲脂性的染料，它会不会对胞浆中的尚未分泌的外泌体进行染色呢？谢谢您。

bkpdxpy

我想问一下，为什么都用pkh系列的染料，都是标记膜的。为啥不用Dii，Dio系列的呢？

张无忌123

请教下你是用的是百分之多少的BSA呢？有没有试过这样做后与细胞条件培养，看看能不能进入细胞？

yuantingdong

惜名 发表于 2016-10-21 17:20
如果你再次从PBS里分离exo，就要再次超离了。。。所以，你可以把沉淀直接保存在-80度，不要重悬。或者重 ...

谢谢惜名兄，I see

惜名

yuantingdong 发表于 2016-10-19 08:34
好的，谢谢惜名兄！还请教你一下，外泌体抽提后做WB，但不是立马做，是用PBS溶解放-80°C保存吗？如果这 ...

如果你再次从PBS里分离exo，就要再次超离了。。。所以，你可以把沉淀直接保存在-80度，不要重悬。或者重悬以后，直接加buffer煮沸跑WB，不用提纯、裂解了。用PBS的exo直接跑exo也是可以的

yuantingdong

惜名 发表于 2016-10-18 17:24
1、加多少PBS,你自己要摸索的；2、是的，直接加trizol或ripa

好的，谢谢惜名兄！还请教你一下，外泌体抽提后做WB，但不是立马做，是用PBS溶解放-80°C保存吗？如果这样，在提取蛋白之前用多大离心力可以把外泌体从PBS中分离沉淀出来？谢谢！

惜名

yuantingdong 发表于 2016-10-17 09:54
请教惜名兄，我用的SBI试剂盒提取外泌体，提取出来后，如果做电镜，需要用多少体积PBS溶解外泌体？另外， ...

1、加多少PBS,你自己要摸索的；2、是的，直接加trizol或ripa

yuantingdong

惜名 发表于 2016-10-5 19:46
1、颜色的区别，一个红色，一个绿色，看你需要什么颜色。
2、BSA是相同的，但浓度不一样~
3、标记后重提， ...

请教惜名兄，我用的SBI试剂盒提取外泌体，提取出来后，如果做电镜，需要用多少体积PBS溶解外泌体？另外，如果提取RNA是不是直接加trizol，如果提取蛋白质就直接加蛋白裂解液？谢谢

惜名

微泡biomarker 发表于 2016-10-9 10:37
想向大神问一下，这个红色和绿色是一定要在流式里面才能看到的吗，肉眼可见吗？谢谢 ...

PKH26/67原液，肉眼是能看到颜色的，分别是绿色和红色（在荧光显微镜下则分别是红色和绿色）。你染完exo，提纯后，再重悬，是看不到颜色的，因为量太少了。如果能看到，说明你肯定有了PHK原液的较多残留。PKH流式也可以做，但貌似比较麻烦一点，最常规的是做荧光显微镜或共聚焦。