外泌体BCA测出蛋白浓度太低，请教大家

DBLB · 发表于 2019-10-11 19:11:06

baishixiaoyaozi 发表于 2018-4-19 00:07
5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。

您好，我检测出来蛋白质浓度很低，基本上检测不到，用BCA检测只有30ng/ul左右，但是WB却没有问题，条带很亮。请问这种情况怎么办。我想知道我提取出来的外泌体的真实蛋白浓度。

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-4-19 00:09:04

huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:01
请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug，也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul ...

5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-4-19 00:07:42

huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:01
请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug，也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul ...

5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。

huangjingwei24 · 发表于 2018-4-18 16:01:36

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul，浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1 ...

请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug，也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul吧。
我也遇到WB检测不出来标志蛋白条带的情况。

JKF · 发表于 2018-1-23 21:25:16

张外泌体发表于 2016-12-22 08:43
你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？ ...

测BCA 需要先裂解吗

JKF · 发表于 2018-1-23 21:23:48

我也没有看到沉淀，正在测浓度

exosun · 发表于 2017-2-12 19:08:29

今日事今日毕发表于 2017-1-3 11:12
楼主，新手问一下，你BCA测浓度，是用的试剂盒吗

都是实验室可以直接领的试剂，没有试剂盒。

今日事今日毕 · 发表于 2017-1-3 11:12:09

楼主，新手问一下，你BCA测浓度，是用的试剂盒吗

张外泌体 · 发表于 2016-12-23 09:01:20

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-23 01:56
CD63：Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1： BD Bioscience
这些是我用的抗体，效果还不错。

我试一下，太谢谢你了

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-12-23 01:56:21

张外泌体发表于 2016-12-22 08:43
你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？ ...

CD63：Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1： BD Bioscience
这些是我用的抗体，效果还不错。
你试试actin或GAPDH抗体，外泌体中可以检测到这两个蛋白。或者转膜后用立春红染色看看蛋白含量。

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