请教关于血浆外泌体提取的问题

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-11-16 10:35:40

1. -80保存对外泌体没有太大的影响，注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred microliter is enough for WB or RT-PCR detection of microRNA

baishixiaoyaozi · 发表于 2017-8-17 23:21:40

深呼吸的行者发表于 2017-8-17 21:40
前辈你好，我们想提取外泌体RNA进行测序的话有什么办法提高RNA得率吗？

增加起始的exosome量，如果用Trizol试剂提取，沉淀时放在-20过夜，同时加入glycogen共沉淀。RNAseq，如果用total RNA大约需要1微克；如果用纯化的small RNA大约需要50-100纳克。

baishixiaoyaozi · 发表于 2017-9-5 21:31:47

slxiang 发表于 2017-9-5 10:41
请问肝素钠、EDTA和柠檬酸钠这三种抗凝剂对血浆外泌体的提取有影响么？哪种最合适 ...

如果用试剂盒的话，参考使用说明书。
我们实验室用EDTA，然后超速离心收集，对外泌体没有影响（至少用到外泌体的实验目前为止100%能够重复）。

baishixiaoyaozi · 发表于 2017-9-25 20:48:03

zzycircle 发表于 2017-9-23 20:16
请问可以发一下具体的超离步骤吗？
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~

全血1000g离心10分钟，取血浆，然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心，10000g离心30分钟去除micro-particles（也有的protocol使用0.22um滤膜去除micro-particles），上清转移至超速离心管，100000g离心2小时。沉淀（基本上看不见）用PBS重悬，NTA检测浓度和直径。