外泌体蛋白浓度问题

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-12-9 09:52:59

如果准备做western，弃去上清后，我直接用加入RIPA裂解液，冰上裂解10分钟后，BCA法测浓度。

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-12-9 22:46:28

I got. 如果后续实验需要完整外泌体，我们实验室用NTA测浓度，还有人PBS重悬后取一点直接BCA法测蛋白浓度。

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-1-9 23:08:37

xiaoruan 发表于 2018-1-9 12:10
亲，你的浓度测来是多少呀，用的什么样本，量是多少呀

大鼠原代胶质细胞来源的外泌体，100ml无血清培养基，24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬，BCA定蛋白量，浓度一般0.4-0.5微克/微升。Western，load10微克蛋白。

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-1-13 00:03:50

ronaldchen 发表于 2018-1-12 14:45
请问你做的marker是？ CD63好做么？

CD63, flotilin, tsg101
CD63用的是Santa Cruz的抗体，还可以。Smear大小在50-70Kda之间

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-1-15 01:57:49

ronaldchen 发表于 2018-1-13 23:12
我没做出来，不知道是不是吸的时候把外泌体弄丢了...

弃上清这一步确实要小心，慢慢操作。
你是所有marker都没做出来，还是只有CD63没做出来？

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

站长推荐 /1