乳汁中分离外泌体，抽提RNA，遇到问题，求大神看看

胖子的心境 · 发表于 2016-4-10 13:48:40

最近看了许多关于外泌体的一些相关知识，在开展乳汁外泌体分离的预实验，但是遇到了尴尬。
ps: 因为我们学校没有电镜，所以我打算的是先从分离出来的外泌体RNA抽提开始，间接判断是否得到exosome，确定方法，再进行电镜，nanosight检测。
我的分离步骤是：
1 50ml样品3000g 30min，剔除细胞，脂肪球等；
2 13000g 30min，细胞碎片，残余的细胞等，过0.45um过滤器；
3 100,000g 60min，剔除大的囊泡，过0.22um过滤器（超离是5ml的管子，一次只能4个；最后将4个pool抽提RNA）；
4 135,000g 90min，弃上清液，50ul PBS重悬。
5 用常规Trizol（艾德来）抽提总RNA（RNA电泳什么都看不到

）