【投稿经验】审稿人对SBI试剂盒的疑问及解决

惜名

本人正在投一篇Scientific Reports（水刊，求大神不要嘲笑）
用SBI试剂盒提取的exo，审稿人针对这个方法提出了如下comments，分享给各位群里的战友：

In Fig. 1, western blot analysis was performed using cell lysates and exosome lysates as starting materials. However, purified exosomes, especially if a polymer-based extraction kit such as the Exo-Quick kit is used, are heavily contaminated with carry-over proteins and cell debris from the initial DC culture media. Therefore, the authors should add a control were the same exosome samples are first digested with proteinase K to eliminate extra-exosomal contaminants and then lysed and used for western blot analysis. This control would help determine whether the indicated markers are of exosomal origin or not.  




补实验中。。。都毕业了还要给自己擦屁股，唉。。。

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hzangs 发表于 2016-7-4 09:57
值得借鉴的意见。

审稿人没直接要求用超离重新做，我已经谢天谢地了，哈哈

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微泡biomarker 发表于 2016-7-4 10:01
想问一下这里面用的proteinase K 会不会也降解了exosome 膜上的蛋白呢，还有这个降解时间怎么控制呢。 ...

我也不知道咋控制时间，打算查查资料先试试。。。

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hzangs 发表于 2016-7-4 10:36
proteinase K 这样处理 有人做过？

这个方法我在文献里也没看到过。
但考虑到我现在是补实验，肯定要尊重审稿人的意见了，打算先这样做起来。
这个审稿人既然提出了这个建议，或许也是外泌体的“业内人士”。。。

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Johnny 发表于 2016-7-4 18:19
惜名兄棒棒哒 O(∩_∩)O~

水刊，以后都不好意思讲。。。

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linxian 发表于 2016-7-7 16:32
你好，我想问你用的是什么裂解exosome收取外泌体蛋白的？现在在做这方面的工作，但不知道怎么裂解外泌体并 ...

我用RIPA裂解。

惜名

暂无昵称 发表于 2016-7-8 11:42
求教，外泌体加裂解液的量一般怎么确定呢？或者有参考文献吗？谢谢！！！ ...

自己摸索。。。每种细胞分泌的外泌体量都不一样，你用的提取方法也会影响产量啊。。。

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子非鱼 发表于 2016-7-18 14:58
不知楼主的PK实验补充得怎么样了，期待

最近在搞入职的流程，要进入医院工作了。。。补实验神马的，唉，都是泪。。。

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空谷跫音 发表于 2016-7-26 22:45
大神，我也用跟你一样的试剂盒提的外泌体，请问你提完后怎么保存外泌体的，放在什么溶液里？杂志蛋白含得多 ...

用PBS保存，如果短期内用，我会放在-40度（这个冰箱在实验室里，比较方便）。如果比较长期保存，放在-80堵（这个冰箱在地下室，取用麻烦）。我个人经验，如果是几天之内用的，放在-40肯定没问题~做细胞功能干预、染色标记、蛋白、RNA等都没问题

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我是小白 发表于 2016-10-20 12:03
请问版主，对于蛋白酶K的量控制，或者是具体的操作过程如何做呢？如果加入Triton-100行不行呢？有没有文献 ...

这个我也不知道，哈哈