关于细胞培养上清中提取外泌体的相关问题

lczyld

我培养的是细胞系，准备从培养上清中提取外泌体，有做过相关实验的前辈么。1、大概至少得多少上清，才能理想地提取外泌体？
2、换用无外泌体血清的时机和培养时间
3、用的是培养皿还是培养板
如有相关经验的，希望能给予指导，一起交流交流，十分感谢！

外泌体小天使

lczyld 发表于 2017-9-2 16:09
提了一次，跑蛋白发现没有CD63的条带   现在在找问题 不知道浓缩的步骤对不对 你呢  ...

CD63跑完之后 它的分子量应该就不是24KD了 应该是43KD，你是用的abcam的抗体吗？

baishixiaoyaozi

楠楠 发表于 2017-12-7 10:33
老师，您好，我想问你一下在采用pbs重悬洗去蛋白质的的时候是每个管加10ml吗？还是将几个离心管合到一起 ...

每个管加PBS，洗完后重悬再合并到一起。

楠楠

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-1 23:36
这个很难给你确切答案，不同的细胞系分泌exosome的能力不一样，对血清饥饿的耐受不一样。你可以上pubmed或g ...

老师，您好，我想问你一下在采用pbs重悬洗去蛋白质的的时候是每个管加10ml吗？还是将几个离心管合到一起啊，

baishixiaoyaozi

qyjinghui 发表于 2017-10-29 17:12
还有个问题想请教老师，我们想研究加药处理后细胞外泌体内容物的改变，看到过两种方式，1.加药处理2天后 ...

我倾向于选择第一个实验方案。

夏天

lczyld 发表于 2017-8-2 07:59
谢谢前辈的热心回答！请问您的120ml上清直接拿去超离么，看到文献里有浓缩这一步，不知道怎么做到的。因 ...

请问你买的这个试剂盒效果好吗

丫丫

baishixiaoyaozi 发表于 2017-10-27 20:08
自己超离制备的。
https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-culture/mammalian-cell- ...

好的，非常感谢！

qyjinghui

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-1 23:36
这个很难给你确切答案，不同的细胞系分泌exosome的能力不一样，对血清饥饿的耐受不一样。你可以上pubmed或g ...

还有个问题想请教老师，我们想研究加药处理后细胞外泌体内容物的改变，看到过两种方式，1.加药处理2天后，连同药物和培养液一起丢弃，添加新的培养基继续培养收集外泌体。2.加药处理2天后，将含有药物的培养液收集并分离外泌体成分。这两种哪个方法更科学呢。感谢回答，谢谢

baishixiaoyaozi

丫丫 发表于 2017-10-27 08:16
您好！能透露一下您用的exo-free FBS是什么牌子的吗？

自己超离制备的。
https://www.thermofisher.com/us/ ... e-depleted-fbs.html

https://www.systembio.com/produc ... -isolation/exo-fbs/
这两个链接是文章里经常看见的牌子.

丫丫

baishixiaoyaozi 发表于 2017-10-27 03:43
这个手头还真没有，因为我自己的实验都是用的exo-free FBS养原代胶质细胞。
你试着参考Lonza网站：http:/ ...

您好！能透露一下您用的exo-free FBS是什么牌子的吗？